人的脂肪因子定量分析酶聯免疫檢測試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 。用於體外定量檢測人血清 、血漿或細胞培養上清液中的Vaspin濃度 。使用前請仔細閱讀說明書並檢查試劑組分是否完整 。如有產品包裝破損或質量投拆 ,請在收到貨一個月之內聯係尊龍凱時 。
Vaspin簡介 :
脂肪因子(vaspin) ,也稱為Serpin A12 ,內髒脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑製劑 ,是屬於比氨酸蛋白酶抑製劑家族中的分泌蛋白 。Vaspin 由405個氨基酸組成 ,分子量大約在45-50 kDa 。脂肪因子由內髒珠網膜上或皮下脂肪的脂肪細胞分泌 ,在胃腺 、胎盤和上皮細胞中都有表達 。
脂肪因子與激肽釋放酶7可形成聚合體 ,抑製激肽釋放酶7降解胰島素 ,從而調控胰島素的降糖活性 。脂肪因子在代謝綜合症中可能作為代償性的分子出現 。
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中vaspin的濃度 。vaspin捕獲抗體已預包被於酶標板上 ,當加入標本或參考品時 ,其中的vaspin會與捕獲抗體結合 ,其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。當加入生物素化的抗人vaspin抗體後 ,抗人vaspin抗體與vaspin接合 ,形成夾心的免疫複合物 ,其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。隨後加入辣根過氧化物酶標記的親合素 。生物素與親合素特異性結合 ,親合素連接的酶就會與夾心的免疫複合物連接起來 ;其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。最後加入顯色劑 ,若樣本中存在vaspin將會形成免疫複合物 ,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質 ,在加入終止液後呈黃色 。通過酶標儀檢測 ,讀其450nm處的OD值 ,vaspin濃度與OD450值之間呈正比 ,通過參考品繪製標準曲線 ,對照未知樣本中OD值 ,即可算出標本中vaspin濃度 。
人Vaspin定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:
組分 | 規格(96T/48T) |
人vaspin預包被板 | 12條/6條 |
樣本分析緩衝液 | 5ml/3ml |
標準品稀釋液 | 10ml/5ml |
vaspin標準品 | 4支/2支(凍幹) |
vaspin生物素化抗體 | 10ml/5ml |
親和素連接的HRP酶 | 10ml/5ml |
濃縮洗滌液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
中止液 | 5ml/3ml |
封板膠紙 | 3/2張 |
說明書 | 1份 |
標本收集:
1.標本的收集請按下列流程進行操作 ;
A.細胞上清標本離心去除懸浮物後即可 ;
B.血清標本應是自然凝固後 ,取上清 ,避免在冰箱中凝固血液 ;
C.血漿標本 ,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測 ,
D.標本收集後請分裝 ,凍存於-20℃ ,避免反複凍融 。
2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑 ;
3.標本應清澈透明 ,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除 。
4.請勿使用溶血 ,高血脂或汙染的標本檢測 ,否則結果將不準確
注意事項:
1.試劑盒請保存在2~8℃ 。
2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶 ,請水浴加熱使結晶完全溶解後再配製工作液 。
3.標準品複溶加樣後 ,剩餘部份請丟棄 。
4.底物請勿接觸氧化劑和金屬 。
5.加樣時 ,請及時更換槍頭 ,避免交叉汙染 。
6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份 。
7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要 ,在加液後請輕輕叩擊邊緣以保證混勻 。
8.室溫反應 ,請嚴格控製在25~28℃ 。
9.洗滌過程是至關重要的 ,洗滌不充分會使精確度下降並導致結果誤差較大 。
10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙複孔 。
11.加樣過程中避免氣泡的產生 。
12.血清和血漿標本的檢測時 ,檢測抗體的孵育時間應適當延長 。
檢測前準備工作:
1.試劑盒自冰箱中取出後應置室溫(25~28℃)平衡20分鍾 ;每次檢測後剩餘試劑請及時於2~8℃保存
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水) 。
3.如有5x標準品稀釋液 ,請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4水) 。
4.標準品: 按標簽複溶體積加入標準品稀釋液複溶使vaspin終濃度達到4000pg/ml ,室溫反應 ,請嚴格控製在25~28℃ ,靜置10~15分鍾後輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解 ,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋後依次加入檢測孔中 。(標準曲線取七個點 ,最高濃度為4000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)
洗滌方法:
自動洗板機或人工洗板 :每孔洗滌液為300ul ,注入與吸出間隔15-30秒 。洗板5次 。最後一次洗板完成後將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍幹 。
實驗過程需自備的材料 :
1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭 ;
2.酶標儀 ;
3.自動洗板機 ;
4.去離子水或雙蒸水 ;
操作步驟:
1.通過計算並確定一次性實驗所需的板條數 ,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封 ,保存於4℃ 。
2.建議設置本底較正孔 ,即空白孔,設置方法為該孔隻加TMB顯色液和中止液 。每次實驗均需做標準品對照並畫出標準曲線 。
3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中 ,用封板膠紙封住反應孔 ,室溫(25~28℃)孵育120分鍾 。血清血漿檢測時 ,先加50μl樣本分析緩衝液,再加50μl樣本 , 乳計檢測同血清血漿 ,唾液 ,尿液均直接加100ul檢測 。
4.洗板5次 ,且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。
5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔) 。用封板膠紙封住反應孔 ,室溫(25~28℃)孵育60分鍾 。
6.洗板5次 ,且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。
7.加入親和素連接的HRP酶工作液(100ul/孔) 。用封板膠紙封住反應孔 ,避光室溫(25~28℃)孵育20分鍾 。
8.洗板5次 ,且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。
9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫(25~28℃)孵育20分鍾 。
10.加入終止液50ul/孔,混勻後即刻測量OD450值 。
結果判斷:
1.複孔的值在20%的差異範圍內結果才有效 ,複孔的值平均後可作為測量值 。
2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值 。
3.手工繪製標準曲線 。以標準品濃度作橫坐標 ,OD值作縱坐標 ,以平滑線連接各標準品的坐標點 。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度 。
4.若標本OD值高於標準曲線上限 ,應適當稀釋後重測 ,計算濃度時應乘以稀釋倍數 。
典型數值和參考曲線
濃度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.078 | 0.056 | 0.067 |
123 | 0.3771 | 0.2153 | 0.2962 |
250 | 0.5103 | 0.4921 | 0.5012 |
500 | 0.7451 | 0.6891 | 0.7171 |
1000 | 1.0737 | 1.0671 | 1.0704 |
2000 | 1.5775 | 1.5119 | 1.5447 |
4000 | 2.065 | 2.016 | 2.0405 |
人Vaspin參考標準曲線
注意 :本圖僅供參考 ,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量 。
靈敏度 ,特異性和重複性:
1.靈敏度 :多次重複結果表明 ,最小檢出量為46.8pg/ml
2.特異性 :與人的Serpin A1 、Serpin A3 、Serpin A4 、Serpin A5 、Serpin A6 、Serpin A9 、Serpin A11 、Serpin C1 、Serpin D1 、Serpin E1 、Serpin E2 、Serpin F2 、Serpin F1 、Serpin G1均無交叉反應 。
3.重複性 :板內 ,板間變異係數均<10%.
參考文獻:
1. Han X, et al., 2000, Blood 96: 3049-55.
2. Li, H. et al. (2013} Atherosclerosis 228:61.
3. Jung, C.H. et al. (2011) Biochem. Biophys. Res.
4. Lee, J.A. et al. (2011) Endocr. J. 58:639.
5. Goktas, Z. et al. (2013) Front. Endocrinol. (Lausanne) 4:69.
6. Heiker, J.T. et al. (2013) Cell Mol. Life Sci. 70:2569.
7. Zhu, X. et al. (2013) Amino Acids 44:961.
8. Whisstock JC, et al.,2010, J Biol Chem. 285 (32): 24307-12.
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貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 | 指令 |
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