人胰島素定量分析酶聯免疫檢測試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 。用於體外定量檢測人血清 、血漿或細胞培養上清液中的胰島素濃度 。使用前請仔細閱讀說明書並檢查試劑組分是否完整 。如有產品包裝破損或質量投拆 ,請在收到貨一個月之內聯係尊龍凱時 。
胰島素簡介 :
胰島素是糖代謝中最主要的激素之一 。胰腺的ß細胞島細胞產生胰島素前體蛋白 ,前體蛋白被加工成C肽和胰島素 。它們以等摩爾濃度進入血循環中 。成熟的胰島素由A 、B兩條鏈組成 。這兩條鏈是通過兩個二硫鍵橋接形成有功能的胰島素分子 。
血漿葡萄糖濃度的變化是胰島素產生並分泌的最主要刺激因素 ,產生的胰島素具有一些代謝調節作用 。其最主要的作用是 ,將外周血中糖轉運到肝髒中貯存起來 。一些諸如肝糖生成障礙或在促進血糖升高的激素諸如胰高血糖素 、腎上腺素 、生長激素和皮質醇等作用下促進肝糖分解都可拮抗胰島素的作用 。
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中胰島素的濃度 。胰島素捕獲抗體已預包被於酶標板上 ,當同時加入標本或參考品和HRP耦連的抗人胰島素抗體時 ,其中胰島素的不同位點會與捕獲抗體和HRP耦連的抗人胰島素抗體結合 ,形成夾心複合物 ,錨定在固相載體板上 ,其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。最後加入顯色劑 ,若樣本中存在胰島素將會形成免疫複合物 ,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質 ,在加入終止液後呈黃色 。通過酶標儀檢測 ,讀其450nm處的OD值 ,胰島素濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪製標準曲線 ,對照未知樣本中OD值 ,即可算出標本中胰島素濃度 。
人胰島素定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:
組分 | 規格(96T/48T) |
人胰島素預包被板 | 12條/6條 |
標準品稀釋液 | 10ml/5ml |
人胰島素標準品 | 2支/1支(凍幹)* |
HRP連接的抗體結合物 | 10ml/5ml |
濃縮洗滌液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
終止液 | 5ml/3ml |
封板膠紙 | 3/2張 |
說明書 | 1份 |
標本收集:
1.標本的收集請按下列流程進行操作 ;
A.細胞上清標本離心去除懸浮物後即可 ;
B.血清標本應是自然凝固後 ,取上清 ,避免在冰箱中凝固血液 ;
C.血漿標本 ,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,
D.標本收集後請分裝 ,凍存於-20℃ ,避免反複凍融 。
2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑 ;
3.標本應清澈透明 ,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除 。
4.請勿使用溶血 ,高血脂或汙染的標本檢測 ,否則結果將不準確 。
注意事項:
1.試劑盒請保存在2~8℃ 。
2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶 ,請水浴加熱使結晶完全溶解後再配製工作液 。
3.標準品複溶加樣後 ,剩餘部分請丟棄 。
4.底物請勿接觸氧化劑和金屬 。
5.加樣時,請及時更換槍頭 ,避免交叉汙染 。
6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份 。
7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要 ,在加液後請輕輕叩擊邊緣以保證混勻 。
8.室溫反應 ,請嚴格控製在25~28℃ 。
9.洗滌過程是至關重要的 ,洗滌不充分會使精確度下降並導致結果誤差較大
10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙複孔 。
11.加樣過程中避免氣泡的產生 。
12.血清和血漿標本的檢測時 ,檢測抗體的孵育時間應適當延長 。
檢測前準備工作:
1.試劑盒自冰箱中取出後應置室溫(25~28℃)平衡20分鍾 ;每次檢測後剩餘試劑請及時於2~8℃保存 。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水) 。
3.如有5x標準品稀釋液 ,請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4水) 。
4.標準品: 按標簽複溶體積加入標準品稀釋液複溶使胰島素終濃度達到200 mIU/L ,室溫反應 ,請嚴格控製在25~28℃ ,靜置15~20分鍾後輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解 ,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋後依次加入檢測孔中 。(標準曲線取七個點 ,最高濃度為200 mIU/L,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)
洗滌方法:
自動洗板機或人工洗板 :每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒 。洗板5次 。最後一次洗板完成後將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍幹 。
實驗過程需自備的材料 :
1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭 ;
2.酶標儀 ;
3.自動洗板機 ;
4.去離子水或雙蒸水 ;
操作步驟:
1.通過計算並確定一次性實驗所需的板條數 ,取出所需板條放置在框架內 ,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封 ,保存於4℃ 。
2.建議設置本底較正孔 ,即空白孔,設置方法為該孔隻加TMB顯色液和中止液 。每次實驗均需做標準品對照並畫出標準曲線 。
3.分別將標本或不同濃度標準品(25ul/孔)加入相應孔中 ,快速加入HRP連接抗體工作液(100ul/孔) 。用封板膠紙封住反應孔 ,室溫(25~28℃)孵育120分鍾 。
4.洗板5次 ,且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。
5.加入顯色劑TMB100ul/孔 ,避光室溫(25~28℃)孵育10分鍾 。
6.加入終止液50ul/孔,混勻後即刻測量OD450值 。
結果判斷:
1.複孔的值在20%的差異範圍內結果才有效 ,複孔的值平均後可作為測量值 。
2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值 。
3.手工繪製標準曲線 。以標準品濃度作橫坐標 ,OD值作縱坐標 ,以平滑線連接各標準品的坐標點 。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度 。
4.若標本OD值高於標準曲線上限 ,應適當稀釋後重測 ,計算濃度時應乘以稀釋倍數 。
典型數值和參考曲線
濃度(mIU/L) | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.0957 | 0.1515 | 0.1236 |
6.25 | 0.2963 | 0.3653 | 0.3308 |
12.5 | 0.5215 | 0.6337 | 0.5776 |
25 | 0.7894 | 0.8764 | 0.8329 |
50 | 1.0825 | 1.1933 | 1.1379 |
100 | 1.4356 | 1.5614 | 1.4985 |
200 | 1.9482 | 2.0006 | 1.9744 |
人胰島素參考標準曲線
注意:本圖僅供參考 ,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量 。
靈敏度 ,特異性和重複性:
1.靈敏度 :多次重複結果表明 ,最小檢出量為1.54mIU/L 。
2.特異性 :與人的C肽,Proinsulin ,IGF-I 、IGF-II和大鼠胰島素 、小鼠胰島素不反應 ,與豬 、綿羊和牛的胰島素分別有374% 、48%和31%的交叉反應性 。
3.重複性 :板內 ,板間變異係數均<10%.
參考文獻:
1 、FRIER, B.M., ASHBY, J.P., NAIRIN, I.M. and BAIRS, J.D. (1981).Plasma insulin, C-peptide and glucagon concentrations in patients with insulin-independent diabetes treated with chlorpropamide. Diab. Metab.. 7, 1, 45-49.
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5 、Gaines-Das, R.E. and Bristow, A.F. (1988) WHO International reference reagents for human proinsulin and human C-peptide. J Biol Stand 16:179-186
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貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 | 指令 |
HH-82 | 人的胰島素樣因子1ELISA試劑盒Human IGF-1 ELISA KIT | 96T | ¥3800.00 | 放入購物車 》 |
HH-72 | 人的胰島素ELISA試劑盒Human insulin ELISA KIT | 96T/48T | ¥4200.00/2600.00.00 | 放入購物車 》 |