人自然殺傷細胞刺激因子定量分析酶聯免疫檢測試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 。用於體外定量檢測人血清 、血漿或細胞培養上清液中的IL-12P70濃度 。使用前請仔細閱讀說明書並檢查試劑組分是否完整 。如有產品包裝破損或質量投拆 ，請在收到貨一個月之內聯係尊龍凱時 。

IL-12P70簡介 ：

IL-12P70也稱為自然殺傷細胞刺激因子（NKSF）或細胞毒性淋巴細胞成熟因子(CLMF)主要是由受激發的巨噬細胞產生的多效性細胞因子 。IL-12P70還可由樹突狀細胞 、單核細胞 、郎格罕細胞 、嗜中性粒細胞和角化細胞等產生 。

具生物學活性的人IL-12P70是二硫鍵連接一個40 kDa (p40)和35 kDa (p35)的亞基的異型複合體 ，即70 kDa (p70) 。成熟的人40 kDa (p40)亞基有13個半胱氨酸和5個可糖基化的N末端的N313個氨基酸的蛋白 。無論是p40 還是 p35亞基都不具有IL－12的生物學活性 ，但由兩個p40亞基構成的同型複合物可與IL-12P70受體結合 ，從而充當IL-12P70的拮抗劑 。雖然小鼠的IL-12P70對人和小鼠細胞都有活性 ，但人的IL-12P70隻對人細胞有生物活性 。

IL-12P70對T淋巴細胞和自然殺傷(NK)細胞有多種作用 ，這些作用包括在T細胞和NK細胞中誘導幹擾素和腫瘤壞死因子的生產 ，提高T細胞和NK細胞毒素的活性的以及刺激T細胞和NK細胞的分化 。IL-12P70是IFN-γ的強烈誘導物 ，但誘導出的IFN-γ反過刺激吞噬細胞產生IL-12P70和其它促炎性因子 ，這樣 ，由IL-12P70誘導的IFN-γ就在感染時促炎症反應中反饋放大的機理中扮演重要的角色 。IL-12P70 在通過提高Th1細胞介導的免疫反應中有重要作用 。

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中IL-12P70的濃度 。IL-12P70捕獲抗體已預包被於酶標板上 ，當加入標本或參考品時 ，其中的IL-12P70 會與捕獲抗體結合 ，其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。當加入生物素化的抗人IL-12P70 抗體後 ，抗人IL-12P70 抗體與IL-12P70 接合 ，形成夾心的免疫複合物 ，其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。隨後加入辣根過氧化物酶標記的親合素 。生物素與親合素特異性結合 ，親合素連接的酶就會與夾心的免疫複合物連接起來 ；其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。最後加入顯色劑 ，若樣本中存在IL-12P70 將會形成免疫複合物 ，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質 ，在加入終止液後呈黃色 。通過酶標儀檢測 ，讀其450nm處的OD值 ，IL-12P70 濃度與OD₄₅₀值之間呈正比 ，通過參考品繪製標準曲線 ，對照未知樣本中OD值 ，即可算出標本中IL-12P70 濃度 。

人IL-12P70定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

標本收集:

1.標本的收集請按下列流程進行操作 ；

A.細胞上清標本離心去除懸浮物後即可 ；

B.血清標本應是自然凝固後 ，取上清 ，避免在冰箱中凝固血液 ；

C.血漿標本 ，推薦用EDTA的方法收集 ；

D.若待測樣本不能及時檢測 ，標本收集後請分裝 ，凍存於－20℃ ，避免反複凍融。

2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑 ；

3.標本應清澈透明 ，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除 。

4.請勿使用溶血 ，高血脂或汙染的標本檢測 ，否則結果將不準確 。

注 ：人血清或血漿樣本請用樣本分析緩衝液做倍比稀釋後再檢測 。

注意事項:

1.試劑盒請保存在2～8℃ 。

2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶 ，請水浴加熱使結晶完全溶解後再配製工作液 。

3.標準品複溶加樣後 ，剩餘部份請丟棄 。

4.底物請勿接觸氧化劑和金屬 。

5.加樣時 ，請及時更換槍頭 ，避免交叉汙染 。

6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份 。

7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要，在加液後請輕輕叩擊邊緣以保證混勻 。

8.室溫反應 ，請嚴格控製在25～28℃ 。

9.洗滌過程是至關重要的 ，洗滌不充分會使精確度下降並導致結果誤差較大 。

10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙複孔 。

11.加樣過程中避免氣泡的產生 。

12.血清和血漿標本的檢測時 ，檢測抗體的孵育時間應適當延長 。

檢測前準備工作:

1.試劑盒自冰箱中取出後應置室溫（25～28℃）平衡20分鍾 ；每次檢測後剩餘試劑請及時於2～8℃保存 。

2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水) 。

3.如有5x標準品稀釋液 ，請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋備用 。

4.標準品: 按標簽複溶體積加入標準品稀釋液複溶使IL-12P70終濃度達到1000pg/ml ，室溫反應 ，請嚴格控製在25～28℃ ，靜置10~15分鍾後輕輕混懸（建議抽吸幾次）待徹底溶解 ，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋後依次加入檢測孔中 。（標準曲線取七個點 ，最高濃度為1000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）

洗滌方法:

自動洗板機或人工洗板 ：每孔洗滌液為300μl ，注入與吸出間隔15-30秒 。洗板5次 。最後一次洗板完成後將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍幹 。

實驗過程需自備的材料：

1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭 ；   

2.酶標儀 ；

3.自動洗板機 ；                     

4.去離子水或雙蒸水 ；

操作步驟:

1.通過計算並確定一次性實驗所需的板條數 ，取出所需板條放置在框架內 ，暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封 ，保存於4℃ 。

2.建議設置本底較正孔 ，即空白孔,設置方法為該孔隻加TMB顯色液和中止液 。每次實驗均需做標準品對照並畫出標準曲線 。

3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中 ，用封板膠紙封住反應孔 ，室溫（25～28℃）孵育120分鍾 。對於血清或血漿標本 ，請加入50 ul樣本分析緩衝液後加50 ul標本 ，如稀釋量大 ，請將樣本與樣本分析緩衝液等量加入 ，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul 。      

4.洗板5次 ，且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。

5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔) 。用封板膠紙封住反應孔 ，室溫（25～28℃）孵育60分鍾 。   

6.洗板5次 ，且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。

7.加入親和素連接的HRP酶工作液(100ul/孔) 。用封板膠紙封住反應孔，避光室溫（25～28℃）孵育20分鍾 。

8.洗板5次 ，且最後一次置厚吸水紙上拍幹 。

9.加入顯色劑TMB100ul/孔 ，避光室溫（25～28℃）孵育20分鍾 。

10.加入終止液50ul/孔,混勻後即刻測量OD450值 。

結果判斷:

1.複孔的值在20%的差異範圍內結果才有效 ，複孔的值平均後可作為測量值 。

2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值 。

3.手工繪製標準曲線 。以標準品濃度作橫坐標 ，OD值作縱坐標 ，以平滑線連接各標準品的坐標點 。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度 。

4.若標本OD值高於標準曲線上限 ，應適當稀釋後重測 ，計算濃度時應乘以稀釋倍數 。

典型數值和參考曲線

人IL-12P70參考標準曲線

注意 ：本圖僅供參考 ，應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量 。

靈敏度 ，特異性和重複性:

1.靈敏度 ：多次重複結果表明 ，最小檢出量為5.8pg/ml 。

2.特異性 ：與人的G-CSF 、IL-6 、IL-12/IL-23 p40及小鼠IL-12 p70 、IL-12/IL-23 p40無交叉反應性 。

3.重複性 ：板內 ，板間變異係數均<10%.

參考文獻:

1. Verma, N.D. et al. (2004) SwissProt Accession #:Q9R103.

2. Hamza, T. et al. (2010) Int. J. Mol. Sci. 11:789.

3. Shortman, K. and W. Heath (2010) Immunol. Rev. 234:18.

4. Gearing, D.P. and D. Cosman (1991) Cell 66:9.

5. Khalife, J. et al. (1998) Eur. Cytokine Netw. 9:69.

6. Kang, K. et al. (1996) J. Immunol. 156:1402.

ELISA Kit for the Quantitative Analysis of Human IL-12P70

The human IL-12P70 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit is used for detection of human IL-12P70 in cell culture supernatants,human serum and plasma.THE ELISA KIT IS FOR RESEARCH USE ONLY. Please read this instruction manual carefully and check out the material provided before use, and you can contact with our company if any questions. You can enter our website or call us for other aim.

Introduction

IL-12P70 pleiotropic cytokine, formerly termed cytotoxic lymphocyte maturation factor (CLMF) or natural killer cell stimulatory factor (NKSF), which is produced primarily by stimulated macrophages. IL-12P70 may be produced by cells include dendritic cells, monocytes , Langerhans cells, neutrophils, and keratinocytes.Biologically.

Active human IL-12P70 is a disulfide-linked, 70 kDa (p70) heterodimeric glycoprotein composed of a 40 kDa (p40) subunit and a 35 kDa (p35) subunit. Mature human p40 subunit has 313 aa, with 13 cysteines and five potential N-linked glycosylation sites. Both p40 and p35 subunits have not activity same with IL-12P70, While the p40 homodimer has been shown to bind the IL-12P70 receptor and is an IL-12P70 antagonist .Although mouse IL-12P70 is active on both human and mouse cells, human IL-12P70 is only active on human cells.

IL-12P70 exerts a variety of biological effects on T and natural killer cells. Some of these effects include the induction of IFN-γ and TNF-α production by T and NK cells, the enhancement of cytotoxic activity of T and NK cells and the stimulation of T and NK cell proliferation. As a potent inducer of interferon gamma (IFNγ) production, the IFNγ then enhances the ability of the phagocytic cells to produce IL-12P70 and other proinflammatory cytokines. Thus, IL-12P70 induced IFNγ acts in a positive feedback loop that represents an important amplifying mechanism in the inflammatory response to infections. IL-12P70 has also been shown to be a central mediator of the cell-mediated immune response by promoting Th1 development .

Principles of the Test

The kits is a solid sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for detection of human IL-12P70. An anti-human IL-12P70 monoclonal antibody has been absorbed onto the wells of the microtiter strips provided. Samples including specimens or standards were pipetted into wells. The human IL-12P70 in specimens or standards would be captured by the coated antibody and the free others were removed by washing. The human IL-12P70 biotin-conjugated antibody were added and binds to human IL-12P70 captured by the first antibody, which formed a sandwich. Streptavidin-HRP would be added and binds to the biotin conjugated antibody, then free Streptavidin-HRP would be removed during a wash step. After this, subtrate solution would be added and catalyzed by the HRP, and a coloured product is formed. The intensity of the colored product is used to calculate in proportion to the amount of human IL-12P70 in the original specimen.  

Materials provided with the kits:

reagent	96/48Test Kit
Assay Buffer	5ml/3 ml
Human IL-12P70 Antibody-Coated Wells	12 strips/6 strips
相關產品 貨號 產品名稱 規格 價格 指令 HH-09 人白細胞介素12P70 ELISA試劑盒 Human IL-12P70 ELISA KIT 96T/48T ￥2800.00/1760.00.00 放入購物車 》 HH-24 人白細胞介素22ELISA試劑盒Human IL-22 ELISA KIT 96T ￥3800.00 放入購物車 》 HH-01 人白細胞介素1α ELISA試劑盒 Human IL-1αELISA KIT 96T/48T ￥2800.00/1760.00.00 放入購物車 》 HH-02 人白細胞介素1β Human IL-1β ELISA KIT 96T/48T ￥2800.00/1760.00.00 放入購物車 》 公司簡介 / Company profile 上海尊龍凱時生物科技有限公司 Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.        公司主要依托複旦大學、同濟大學等上海地區多家著名高校 ，擁有一支富有經驗的開發團隊 ，專業從事細胞及細胞... 聯係尊龍凱時 / Contact 電　話 ：021-69950217  173-2144-0983 傳　真 ：021-69950218 郵　箱 ：2078251929@qq.com 郵　編 ：201800 地　址 ：上海市嘉定區翔江公路518號寅尚產業園D座210室 Copyright © 2018 CHUANQIU Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved. 滬ICP備18030131號-1 申請試用裝 021-69950217