貨號

H180

種屬

人

細胞來源

從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

生長特性

輕度貼壁 上皮樣

培養條件

培養基 ：RPMI-1640 +10% FBS+2mM Glutamax+1mM 丙酮酸鈉+1%雙抗

培養瓶 ：cellbind細胞培養瓶（corning,3289）

溫度 ：37℃     氣相 ：95%空氣 ，5%二氧化碳

傳代

1.該細胞貼壁程度很輕 ，到貨後大部分細胞懸浮 ，培養瓶不開封 ，瓶口酒精擦拭後平躺放置在培養箱 ，在通常培養單層細胞的條件下培養24到48小時 。細胞貼壁後再更換新培養基 。如有需要 ，也可以收集培養瓶中的培養基和細胞 ，在300g下離心15min ，棄去上清 ，加入7-10ml培養基重懸細胞 ，再放到新培養瓶培養 。根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代 ，該細胞生長緩慢 ，並會使培養基迅速變酸 ，一般2到3天換一次液 ；

2.待細胞長滿瓶底麵積70%-80% ，需要對其進行傳代 ，傳代比例為1:2到1:4 ；每次傳代後48h內不要讓細胞受到幹擾以免影響細胞貼壁 。

3傳代步驟 ：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置於37°預熱 ，倒掉培養瓶中的培養基 ，往培養瓶中加入3-5 ml PBS ，輕晃洗滌後棄去 。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶 ，置於37°孵育消化（第一次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察 ，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓 、輕拍瓶壁見細胞脫落為最佳消化時間 ，記錄最佳消化時間 ，以便於下次消化） ，消化好後加入3ml完全培養基終止消化 。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞 ，使之完全脫落 ，然後收集細胞懸液 ，並反複吹打使細胞團分散 ，1200rpm離心3min ，棄上清 ，加入完全培養基重懸細胞 ，進行傳代 。

保存

凍存條件 ：90%FBS+10%DMSO

(備注 ：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100） ，用4度保存的冷凍液直接重懸細胞 ，不能預熱後使用 。)

保存條件 ：液氮存儲

供應限製

經供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養瓶有破裂 ，培養液有漏液 ：細胞極大可能會汙染 ，所以尊龍凱時會及時安排幫老師解決 。

2.運輸用的培養基不能用於後續的細胞培養 。第一次傳代建議傳代比例為1:2 。

3.細胞漂浮 ：該細胞貼壁程度很輕 ，到貨後大部分細胞懸浮 ，培養瓶不開封 ，瓶口酒精擦拭後平躺放置在培養箱 ，在通常培養單層細胞的條件下培養24到48小時 。細胞貼壁後再更換新培養基 。如有需要 ，也可以收集培養瓶中的培養基和細胞 ，在300g下離心15min ，棄去上清 ，加入7-10ml培養基重懸細胞 ，再放到新培養瓶培養。