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如何提高細胞凍存率 ?

大家講一個笑話 :某小師妹跟著師兄做細胞凍存實驗 ,複製粘貼了每個步驟 ,結果複蘇的時候還是死了一大片 。好笑嗎 ?哈哈哈 ,可是你們為什麽要哭啊...

對於很多科研汪來說 ,細胞是最脆弱又重要的寶貝之一 ,承擔著重要的實驗數據希望 。尤其是在凍存複蘇的時候 ,經常會因為一些小細節導致問題 。比如 :

風水

出各種玄學狀況的時候 ,汙染物是毋庸置疑的源頭 ,培養室的空氣 、培養箱內循環的空氣 、培養箱的層架以及顯微鏡的載物台和物鏡都可能是汙染源 。

有就是你自己 ,進入無菌間後盡量不要說話 ,進入無菌間後盡量不要說話,進入無菌間後盡量不要說話 。打開培養箱後絕對不能說話 ,打開培養箱後絕對不能說話 ,打開培養箱後絕對不能說話 。

不要對著它念叨 ,要用你的心去感化細胞 ,重要的事情說三遍 。

溫度

慢凍快融是細胞凍存複蘇的核心關鍵詞之一 。常見的是 -4℃ → -20℃ - 40℃→ -80℃ → 液氮 ,有著嚴格的梯度降溫 。

目前更多使用程序降溫盒 ,將細胞凍存管放於盒內 ,之後再置於超低溫冰箱 ,程序降溫盒可控製每分鍾下降1 ,一定要避免溫度原因導致細胞自取滅亡 ;除非使用了成分經過優化 、經過嚴格測試的凍存液 ,才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟 。保存的時候也要保證整個細胞都是處於液氮的液麵下方 ,避免溫度對細胞存活的影響 。

水土

解凍後的細胞要用和以前一樣的培養液和血清 。因為每一種細胞都有自己特定的 ,並且已經熟悉了的生長環境 。突然使用不一樣的培養液和血清 ,會造成細胞生長不良 ,甚至死亡 。這和一個人突然離家千裏 ,會水土不服是一樣的道理 。

除了操作中的各種小細節 ,還有一個實驗雷區 ,就是配製細胞凍存液 。常見的凍存液配製要遵循培養基 + 血清 + DMSO 的成分要求 ,根據細胞實際判斷成分配比 ,還建議使用程控儀 ,注意配製溫度 ,一個不小心就又會影響細胞的存活效果 。所以今天 ,小秋給各位養細胞的科研汪們帶來一款細胞神器——HAKATA無血清細胞凍存液 。

細胞凍存液

這是一款無血清即用型細胞凍存液 ,最大的特點就是無需程序降溫盒及稀釋 ,無需分步降溫 ,直接使用 !可在 - 80℃長期保存細胞 、腫瘤細胞和常規細胞 。冷凍細胞時 ,用HAKATA細胞凍存液懸浮處於對數生長期的細胞 ,不需預冷 ,直接 - 80℃冷凍保存 ,也可用液氮快速冷凍細胞 ; 複蘇時用恒溫箱或者水浴鍋快速複蘇細胞即可 。不僅操作方便 ,更能提供穩定的凍存效果 ,獲得更好的細胞活力 。

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