最近 ，小編的細胞總是處於無休止的汙染 ，汙染 ，複蘇和再汙染的循環中 。

我相信有一個以上的童鞋有這樣的麻煩 ，所以今天尊龍凱時將討論細胞汙染的問題 。

首先 ，您需要知道什麽是細胞汙染 - 任何對細胞生長有害的成分或導致細胞不純的異物都被視為汙染 。根據汙染源，細胞汙染可分為化學汙染 ，物理汙染和生物汙染 。

一是化學汙染

用於細胞培養的培養基用高壓蒸汽滅菌 。其中 ，血清是細胞培養中常用的培養基 ，血清中存在潛在的化學汙染 。此外 ，血清成分不確定 ，血清對不同細胞的生長有不同的影響 ，包括毒副作用 。

二是物理汙染

物理汙染主要是指通過溫度 ，振動 ，輻射和輻射等物理因素破壞細胞 。細胞培養基等暴露於輻射或紫外光引起細胞代謝的改變 。

恒溫培養箱周圍有設備產生機械振動 ，也可能對細胞生長有影響 。

三 ，微生物汙染（這是尊龍凱時經常遇到的）

細菌 ：

常見的汙染物之一 ，如大腸杆菌和葡萄球菌 ，是常見的細菌汙染 。細菌汙染很容易找到 。當培養的細胞被細菌汙染時 ，培養液將變渾濁並且pH將改變 。還有少量的培養液通過肉眼觀察而沒有太大變化 ，細菌隻能在顯微鏡下找到 。

如果您正在飼養自己的細胞 ，建議您每天查看它們 。

解 ：

1）無論什麽汙染 ，隻要細胞被汙染 ，如果不是非常珍貴的細胞，丟棄並重新培養 。

在這裏進行再培養時 ，要注意自己細胞的汙染狀況 。如果它在傳遞時被汙染 ，則取決於受汙染的光盤數量 。如果全部汙染 ，那麽所有的東西都被更換 ，先取出試劑 。原因是 ，等待您停止汙染 ，您可以嚐試使用原始試劑 。

如果更換試劑或汙染 ，則需要清潔培養箱和房間;如果是汙染之一 ，可能是你自己操作的原因 ，下次需要多加注意 ，

通常，尊龍凱時隻需要在需要使用它們時提高細胞 。它很少用於練習尊龍凱時的手 。因此 ，汙染的第一時刻是確保下一個細胞不會汙染 ，然後細胞被提升並慢慢找到原因 。

2）如果細胞非常稀少 ，需要保存珍貴細胞 ，建議配置含有10倍雙抗體PBS和5倍雙抗體的完整培養基 。然後用10倍雙抗體PBS洗滌細胞5-10次 。

然後 ，細胞用5倍雙抗體完全培養洗滌3次以上 ，培養後每1小時更換一次 ，最後培養過夜2倍雙抗體培養基 ，替換為雙抗生素完全培養基 。第二天 。培養 ，傳代兩次以上 ，如果沒有發現汙染 ，可將其冷凍 ，並使一些細胞在沒有抗生素的培養基中繼續培養超過48小時 ，最後確定細胞不含汙染物 。

菌 ：

其中一種常見的汙染物是曲黴菌 ，白色念珠菌 ，酵母 ，黑黴病 ，孢子 ，並且在雨季更容易受到汙染 。現在尊龍凱時正處於雨季 ，真菌也來了 。

真菌生長相對緩慢 ，並且在疾病開始時對細胞生長沒有太大影響 。首先 ，如果隻是觀察細胞 ，可能會被忽略 ，但經過很長一段時間後 ，細胞的活力會變差 。培養基是透明的 ，不會改變顏色 。其中可以看到白色或淺黃色的浮動物體 。在顯微鏡下還有絲狀 ，管狀 ，樹枝狀或橢圓形物質 。念珠菌和酵母菌株呈橢圓形 。當你看到明顯的菌絲時 。

解 ：

1）因為黴菌有孢子 ，所以酒精 ，清潔和熄滅 ，紫外線等不可能去除黴菌 ！上麵的第一個 ，不重要 ，立即處理 。或與其他細胞分離 ，更換所用的實驗室設備和試劑 。

2）最好防止真菌 ，用硫酸銅溶液擦拭CO2培養箱 ，並在水盤中加入飽和量的硫酸銅 。

3）將飽和消毒的磷酸氫二鈉高鹽液加入培養箱的托盤中 ，以防止黴菌汙染 。

4）應定期（1月左右）清潔孵化器 ，特別是在雨季 。

5）為防止黴菌汙染 ，在培養基或放線菌素D或雙抗體中加入3ul / ml兩性黴素或製黴菌素。

6）最重要的是培養良好的無菌概念 ，避免將培養基灑入培養箱和生物安全櫃 。這些培養基灑在培養箱中 ，為細菌和真菌的繁殖提供了良好的條件 。

7）如果被汙染 ，將所有細胞從受汙染的CO2培養箱中轉移出來並用過氧乙酸（所有 ，特別是四個角落）清洗培養箱 。將過乙酸置於培養箱中1小時以使蒸汽充滿 。在過乙酸的氣味消散後 ，將其轉移到細胞中 。

8）徹底消毒環境 。整個培養室用福爾馬林和高錳酸鉀熏蒸 。用苯酚洗滌培養箱內部 ，包括托盤 ，密封2天 。

9）一旦細胞被汙染 ，就很難保存 。即使使用製黴菌素或放線菌素D ，它也是一種傷害敵人10,000的方法 。高濃度的抗真菌劑對細胞有毒 。

如果發現新的汙染 ，pbs洗幾次細胞 ，盡可能洗滌細菌 ，然後用兩性黴素25ug / ml處理12-24小時 ，改變溶液後改變兩性黴素3-5ug / ml ，改變每天連續液體 ，連續處理2-3天後 ，繼代培養後 ，稍微接種到35mm培養皿中 ，不含兩性黴素 ，觀察黴菌是否繼續生長 ，剩餘的傳代細胞繼續加入兩性黴素直至不是細胞添加沒有黴菌生存 。  。

黑膠蟲 ：

它可以穿透過濾膜或通過空氣傳播 。在低倍率下是黑點 。黑蟲可以在高放大倍數下遊泳和遊泳 。一般來說 ，它不會影響太多 。仍然可以使用細胞 。的 。通常 ，細胞生長狀態良好 ，觀察到的移動物體沒有顯著增加 ，並且培養基的顏色和透明度沒有顯著改變 ，並且在同一批血清培養細胞中可以發現類似的現象 。它對細胞生長狀態沒有顯著影響 ，並且在細胞增殖旺盛後自然消失 ，除了更換血清外不需要特殊處理 。

可能的汙染原因 ：可能有許多原因 ，如液體消毒 ，操作問題 ，環境問題等。

定期預防汙染 ：

1 ，在培養基中加入雙抗體 ，預防量可以 ，10ul / ml 。然而 ，雙抗體會影響細胞的狀態 ，因此有必要在轉染前去除雙抗體並檢測細胞的某些指標 ，以避免影響實驗結果 。

2 ，培養箱應定期或紫外線消毒 ，培養箱應用酒精和解結器進行檢測 。培養箱中的水優選為三蒸水 。

3 ，超淨平台物料提取設備培養液瓶操作必須按規定操作 ，不要隨意操作 ，快速 ，頻繁地四處走動 。

4 ，超潔淨平台的風扇不能太大 ，風扇要6-8格 。否則也可能導致黴菌汙染

5.無菌室用甲醛熏蒸後 ，可用相同量的氨水中和 ，可在約數小時內操作 。

6 ，操作人員個人原因 ：這是最可預防的 ，在使用設備之前必須檢查解決方案是否可用 ，是否過時 ，如果您是過時的 ，請不要冒險 ，請務必重新消毒或定期治療 ，特別是有時沒有麵罩 ，手套 ，並且在操作時大聲說話是最不合適的 。

最後 ，小編想說 ：

細胞汙染 ，預防是硬道理 ！  ！  ！不要考慮補救措施 ，失去兩者並不是一個好主意 ，最重要的是預防 ！預防 ！預防 ！  ！  ！