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細胞複蘇與凍存


細胞的複蘇與凍存
細胞複蘇 :指將凍存的細胞解凍之後重新培養 ,細胞恢複生長的過程 。複蘇過程如下圖所示 :

 

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常見問題解答 :Q :為什麽細胞複蘇後 ,很多難以貼壁?
A :忽略培養基的問題 ,主要考慮細胞凍存時狀態差或者複蘇時動作太慢導致細胞死亡 。切記最重要的融化速度要快 ,可不時搖動冷凍管 ,使之盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃) 。Q :為什麽細胞貼壁了 ,卻長不起來?
A :此時需要考慮的是細胞密度問題 ,一些細胞傾向於維持一定的密度 ,若複蘇的細胞生長緩慢 ,可將細胞轉移到較小的培養瓶/皿中培養 。

 


細胞凍存 :將細胞放在低溫環境(-70℃~-196℃) ,細胞內的代謝降低 ,可最大限度的保存細胞活力 ,以便長期儲存 。


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常見問題解答 :
Q :目前細胞凍存液多采用的什麽配方?


A :目前細胞凍存液的配方有很多種 ,如培養基 :血清 :DMSO=7:2:18:1:15 :4 :1 ,或直接用血清 :DMSO=9:1 。 這裏推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液 ,無需程序降溫 ,細胞存活率和活力高達90%-98% ,適用於幹細胞凍存及無血清培養細胞 。

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Q :若沒有細胞凍存盒 ,尊龍凱時該怎麽辦?


A :可先將凍存管放入4℃冰箱中10min ,再移至-20℃冰箱30min ,-80℃冰箱2h或過夜 ,最後放入液氮罐內 。為了節約時間 ,還可直接在凍存盒外包裹一團棉花,用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點,將細胞轉移至-80℃冰箱過夜 ,再轉移至液氮保存 。

 

Q :細胞凍存時對細胞量有要求嗎?


A :細胞複蘇時會有一定的細胞死亡 ,因此細胞的濃度應足夠高 ,起始濃度106—107/ml/;

 


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