細胞的複蘇與凍存
細胞複蘇
:指將凍存的細胞解凍之後重新培養
,細胞恢複生長的過程
。複蘇過程如下圖所示
:
常見問題解答
:Q
:為什麽細胞複蘇後
,很多難以貼壁?
A
:忽略培養基的問題
,主要考慮細胞凍存時狀態差或者複蘇時動作太慢導致細胞死亡
。切記最重要的融化速度要快
,可不時搖動冷凍管
,使之盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)
。Q
:為什麽細胞貼壁了
,卻長不起來?
A
:此時需要考慮的是細胞密度問題
,一些細胞傾向於維持一定的密度
,若複蘇的細胞生長緩慢
,可將細胞轉移到較小的培養瓶/皿中培養
。
細胞凍存 :將細胞放在低溫環境(-70℃~-196℃) ,細胞內的代謝降低 ,可最大限度的保存細胞活力 ,以便長期儲存 。
常見問題解答
:
Q
:目前細胞凍存液多采用的什麽配方?
A
:目前細胞凍存液的配方有很多種
,如培養基
:血清
:DMSO=7:2:1或8:1:1或5
:4
:1
,或直接用血清
:DMSO=9:1
。 這裏推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液
,無需程序降溫
,細胞存活率和活力高達90%-98%
,適用於幹細胞凍存及無血清培養細胞
。
Q :若沒有細胞凍存盒 ,尊龍凱時該怎麽辦?
A
:可先將凍存管放入4℃冰箱中10min
,再移至-20℃冰箱30min
,-80℃冰箱2h或過夜
,最後放入液氮罐內
。為了節約時間
,還可直接在凍存盒外包裹一團棉花,用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點,將細胞轉移至-80℃冰箱過夜
,再轉移至液氮保存
。
Q :細胞凍存時對細胞量有要求嗎?
A
:細胞複蘇時會有一定的細胞死亡
,因此細胞的濃度應足夠高
,起始濃度106—107個/ml/管;