聽說同學們的養的細胞常常因為各種原因一再受損或者死亡 ，今天小秋拿出畢生功力，為大家講述細胞培養中那些你可能忽略的小細節

細胞的營養來源

針對大多數腫瘤細胞 ，營養配方一般為 ：90%合成培養基(DMEM 、RPMI1640 、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);為了防止汙染 ，可以加1%雙抗!

常見問題解答 ：

Q ：針對不同細胞 ，細胞培養基配方一樣嗎?如何獲知呢?

A ：不同細胞的培養基是不同的 。在小秋家購買的細胞 ，針對不同細胞株 ，會有詳細介紹 ，包括生長的狀態圖 、培養基的類型等 。

Q ：培養基為什麽一般都是偏紅色?

A ：因為培養基加了酚紅來顯示顏色 ，指示pH範圍為6-8 ，顏色會由黃變為紫紅 。這是為了尊龍凱時能更直觀觀察培養液的變化 ，如變黃 ，則代表偏酸 ，偏堿性了就顯示偏紫色 。一般來說 ，細胞吸收營養後 ，變黃後就暗示尊龍凱時要換培養基啦!所以密切觀察很重要哦!

Q：大多數細胞係可以在不止一種培養基中生長 ，那可以替換嗎?

A ：不建議更換指定的培養基 ，因為當培養基改變時 ，細胞的性質可能也會變化 。

Q ：若是細胞生長緩慢 ，是否可以增加血清比例?

A ：可以!

細胞的生長環境舒適無菌的環境是細胞健康成長的基礎 。如下圖為培養細胞的器皿 ，包括形狀 、規格 、用途多樣的培養瓶 、培養皿及培養板 。最終住進37℃，5%CO2的恒溫培養箱 。常見問題解答 ：

Q ：細胞培養板規格不一 ，如何正確選用?
A ：根據不同規格的細胞培養皿/板容量及用途 ，如流式一般用 6 孔 ，爬片一般用 24 孔 ，MTT 一般用 96 孔等 。

Q：細胞培養皿和培養瓶區別?
A ：就細胞培養狀態來說 ，培養瓶和培養皿沒有太大區別 ，主要在於安全係數(培養瓶>培養皿) 、培養細胞數量(大培養瓶>培養皿) 。但是培養瓶成本也會相對較高 ，因此無特殊要求 ，一般選擇培養皿即可 。

細胞的複蘇與凍存
細胞複蘇 ：指將凍存的細胞解凍之後重新培養 ，細胞恢複生長的過程 。複蘇過程如下圖所示 ：

常見問題解答 ：Q ：為什麽細胞複蘇後 ，很多難以貼壁?
A ：忽略培養基的問題 ，主要考慮細胞凍存時狀態差或者複蘇時動作太慢導致細胞死亡 。切記最重要的融化速度要快 ，可不時搖動冷凍管 ，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃) 。Q ：為什麽細胞貼壁了 ，卻長不起來?
A ：此時需要考慮的是細胞密度問題 ，一些細胞傾向於維持一定的密度 ，若複蘇的細胞生長緩慢 ，可將細胞轉移到較小的培養瓶/皿中培養 。

細胞凍存 ：將細胞放在低溫環境(-70℃~-196℃) ，細胞內的代謝降低 ，可最大限度的保存細胞活力 ，以便長期儲存 。

常見問題解答 ：
Q ：目前細胞凍存液多采用的什麽配方?

A ：目前細胞凍存液的配方有很多種 ，如培養基 ：血清 ：DMSO=7:2:1或8 ：1 ：1或5 ：4 ：1 ，或直接用血清 ：DMSO=9:1 。 這裏小秋推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液 ，無需程序降溫 ，細胞存活率和活力高達90%-98% ，適用於幹細胞凍存及無血清培養細胞 。

Q ：若沒有細胞凍存盒 ，尊龍凱時該怎麽辦?

A ：可先將凍存管放入4℃冰箱中10min ，再移至-20℃冰箱30min ，-80℃冰箱2h或過夜 ，最後放入液氮罐內 。為了節約時間 ，還可直接在凍存盒外包裹一團棉花 ，用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點 ，將細胞轉移至-80℃冰箱過夜 ，再轉移至液氮保存 。

Q ：細胞凍存時對細胞量有要求嗎?

A ：細胞複蘇時會有一定的細胞死亡 ，因此細胞的濃度應足夠高 ，起始濃度106—107個/ml/管;

今天的內容就到這裏了 ，細胞培養中的細節可馬虎不得 ，希望大家可以結合這些小技巧 ，將細胞養的更漂亮 ！

按照國際慣例 ，文末是時候放大招了 ：

好細胞是實驗的關鍵——尊龍凱時生物人源細胞均可提供STR鑒定 ，並且提供實驗技術支持 ，讓你的實驗全程無憂 ！

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好了各位同學們 ，

為了能讓你們畢業 ，小秋也是費盡了心思 ，

但我也隻能幫你們到這裏了 ，

至於能不能畢業，就靠你們自己了...

你們懂我意思吧 ？