小夥伴們可能經曆過:不做實驗時 ,細胞成長迅速;當做實驗時 ,自己的細胞似乎是安眠藥 ,昏昏欲睡
這個時候我該怎麽辦?為了讓尊龍凱時的細胞茁壯成長 ,尊龍凱時自然要找到問題 ,想個辦法!
細胞生長緩慢的常見原因:
(1)培養基可能缺乏細胞生長所需的某種因子 。
通常情況下 ,當小夥伴購買細胞 ,並沒有按照ATCC或國內細胞庫推薦的方法製備培養基 ,使用實驗室兄弟姐妹使用的培養基來培養細胞 。解決方法一般是按照推薦的方法製備培養基 ,或直接購買培養細胞的培養基 。(B)細菌 、支原體 、真菌等汙染:雖然培養基中通常添加雙抗體(青黴素和鏈黴素) ,但如果無菌操作觀念不強 ,仍有可能造成汙染 。處理方法:如果有冷凍細胞 ,可以丟棄汙染細胞 。當然 ,丟棄並不是隨意的 ,扔進垃圾桶 。應按照實驗室生物安全規定進行 。然後複蘇培養物 ,建議培養箱完全消毒 。
如果不冷凍 ,而且這種細胞非常珍貴 ,常用的治療方法是藥物治療:細菌汙染加5-10倍的抗生素;真菌汙染加抗真菌藥物;支原體汙染再加上抗支原體藥物 ,具體藥物可以谘詢技術支持 ,他們會更加專業 。
(C)許多細胞的生長依賴於密度 。如果傳代後細胞密度過小 ,也會影響細胞生長 。這段時間沒有什麽特別好的 ,就是更換液體 。如果細胞培養瓶為T75 ,則可以消化 、離心 、複蘇 ,然後接種到T25瓶中 。
(4)冷凍細胞中添加DMSO(二甲基亞碸)的量不正確 ,沒有逐漸梯度冷卻 。下一次恢複後的細胞總是壞的 。處理方法:按推薦的冷凍保存方法製備冷凍液 。部分細胞適合10% DMSO ,部分細胞適合5% DMSO;嚴格遵循漸變冷卻的原則 ,細胞恢複後迅速解凍。
(5)換液間隔時間太長 。一些小夥伴真的把細胞“佛”係生長 。當他們想到它的時候 ,才會換下液體 ,相信一個句子 。“你已經是一個成熟的細胞了 。你應該學會養活自己 ,成長”。在這種情況下 ,細胞培養瓶中積累了大量的細胞代謝廢物 ,影響細胞活性 。推薦:勤奮點
(6)細胞的“消化”時間不宜過長 ,減少對細胞的損傷;此外 ,EDTA一般添加到胰腺酶中 ,螯合鈣離子 ,影響細胞粘附 。治療方法:控製細胞“消化”時間 ,盡量去除幹淨的胰蛋白酶和EDTA 。
PH值:細胞需要在一定的PH值下生長 ,這個小朋友知道 。但是很多時候PH值是尊龍凱時忽略的東西 ,這也是小秋今天想強調的一點 。隨著使用時間的增加 ,尊龍凱時使用的介質可能會慢慢變成堿性!(當然 ,它也可能變酸 ,但改變堿是常見的) 。一般來說 ,過堿的培養基會影響細胞的生長 。治療:最簡單的方法就是更換新鮮的培養基!當然 ,如果你有時間和條件 ,你可以調整介質的pH值 。