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細胞培養小常識

1.切記 ,細胞培養基的儲存條件是2-8℃ 。如果細胞培養基不小心被凍 ,您應該融化培養基並觀察是否有沉澱產生。如果沒有沉澱產生 ,培養基可以正常使用 ,如果出現沉澱 ,隻能丟棄這些培養基 。

2.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基 ,可能在放置幾天後顏色變紫 。這主要是由於在暴露到周圍的CO2水平時 ,碳酸氫鈉導致了pH值的上升 。您可以在使用前鬆開瓶口 ,在CO2培養箱孵育培養基10-15min ,來校正溶液的pH值(確定鬆開瓶口以保證氣體交換) 。

3.當在無血清培養基中添加抗生素時 ,降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素 。在無血清培養條件下 ,抗生素不被滅活 ,可能對於細胞達到毒性水平 。

4.一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時 ,您應該在兩到三周內使用它 。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解 。

5.總之,大部分添加物和試劑最多可以凍融3次 ,如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉澱 ,將會影響它的性能 。

6.血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體係統 。在免疫學研究 ,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時 ,推薦使用熱滅活血清 。熱滅活是以往公認的操作步驟 ,並沒有確鑿的證據說明這樣做是有益的 。相反 ,對大部分細胞而言 ,GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清 。因為加熱可能使血清中的沉澱增加 ,使您誤以為汙染 。

7.在進行傳代培養時 ,尊龍凱時強烈推薦進行台盼蘭活性記數 。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代 ,不進行活性檢測 ,您可能接種比你認為的低得多的濃度的細胞 ,這常常可能導致生長緩慢或培養物根本不生長 。

 

8.在訂購的細胞到達後 ,應立即複蘇 ,如果培養基還沒有準備好 ,可將其放入液氮中 ,盡快複蘇 。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內 。

 

9.細胞複蘇往往是比較容易出問題的步驟 。請在訂購細胞時就向供應商索取詳細的複蘇步驟 ,並仔細閱讀 。有些供應商就不推薦在複蘇時離心 ,對此類細節 ,應特別留意 。

 

如何避免血清中沉澱物的產生?

 

1. 解凍血清時 ,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫) ,若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃) ,實驗顯示非常容易產生沉澱物 。並隨時將之搖晃均勻 ,使溫度及成分均一 ,減少沉澱的發生 。

 

2. 請勿將血清置於37℃太久 。若在37℃放置太久 ,血清會變得混濁 ,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害 ,而影響血清的質量 。

 

3.血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多 ,若非必要 ,可以無須做此步驟 。

 

4.若必須做血清的熱滅活 ,請遵守56℃ ,30min的原則 ,並且隨時搖晃均勻 。溫度過高 ,時間過久或搖晃不均勻 ,都會造成沉澱物的增多 。


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