血清是細胞培養中唯一外源添加的成分不確定的物質 ，血清的質量對實驗成敗起著關鍵性作用 ，但血清使用不當也可能會導致血清質量下降 ，造成細胞培養效果不理想 。今天來給大家聊聊血清使用中的一些疑惑，幫助大家理清頭緒 ，實驗開展順順利利 。

怎樣確定血清使用濃度 ？

這個隻能通過測試了 。原則上血清添加量不要太多 ，通常分為5% 、10% 、20%幾檔 。部分細胞原代提取時會使用20%血清 ，大部分細胞正常培養時會使用5%～10%的血清濃度 。至於某一株細胞適應什麽樣的血清濃度 ，還需要根據細胞特性 、實驗目的做測試和調校 。

血清使用前需要離心嗎 ？

這個問題我理解為兩種可能。

其一 ，因為血清融解後有“絮狀物”析出 。如果沒有出現其他異常情況 ，或者血清隻是用於細胞培養 ，那麽完全沒有必要離心去除 。尊龍凱時知道血清析出的“絮狀物”主要是血纖蛋白 ，其在血清中含量很高 ，而且高度不溶 ，在血清凍融過程中極易析出 ，但它也是完全無害的 ，甚至能促進細胞生長 。另外 ，它還增強了血清黏性 ，為細胞提供了額外的機械緩衝 。在其析出過程中 ，會粘附培養體係中其他成分 ，離心去除 ，反而會損失營養成分 。

其二 ，實驗要求純淨的培養體係 。培養的細胞需要進一步鑒定 ，如免疫熒光 、流式 、共聚焦拍照等 ，細胞表麵如果有黏性較強的血纖蛋白 ，勢必會影響效果 。那麽 ，建議400g離心5min即可 。如果需要進行精密實驗 ，如分離外泌體等 ，那麽就需要至少100000g離心1.5h以上

血清滅活和不滅活有什麽不一樣 ？

在回答這個問題之前 ，尊龍凱時先要弄清楚滅活究竟滅的是什麽成分的活性 。其實56℃ 、30min的處理隻能去除補體和部分其他蛋白的活性 。補體是免疫係統的一部分 ，在體內可通過多條途徑被激活 ，從而發揮調理吞噬 、裂解細胞 、介導炎症、免疫調節和清除免疫複合物等多種作用 。血清滅活的說法最早是在細胞培養技術發展初期 ，大部分實驗室還在使用小牛血清甚至成體動物血清 ，或者以前培養某些人源細胞時會添加人血清 。因為血清供體已與環境長期接觸 ，體內免疫係統已經經曆了一場又一場的戰鬥 ，而保留了“豐厚的戰利品”——抗體 、補體等 ，這些成分在體內可以由免疫係統清除 ，但在體外的細胞培養中 ，可能會對部分細胞產生損傷 。巧在人們發現這些成分不耐受高溫 ，所以才有了熱滅活處理 。

細胞培養技術發展到今天 ，尊龍凱時已經能把控原材料的質量 。對於血清 ，尊龍凱時會選擇胎牛來源 。因為在體內有胎盤屏障的隔離 ，又尚未接觸體外環境 ，其自身免疫係統 、免疫物質幾乎為零 。這個時候 ，如果不是對血清成分的極度苛刻 ，再談滅活就有些多餘了 。甚至因為熱處理 ，導致血清內大量蛋白析出 ，同時粘附其他成分一起丟失 ，對細胞培養而言就得不償失了 。

怎樣為您的細胞選擇合適的血清 ？

目前市麵上的血清產品五花八門 ，各種品牌宣稱來自各個血源地 ，讓人眼花繚亂 。可以確定的是 ，除了所謂的“水貨” ，它們當中絕大多數都是質量合格的產品 。但合格不一定好用 ，或者說適用於某一種細胞 。要確定一款血清的性能 ，或者從眾多血清來源中挑選一款，唯一的辦法就是篩選驗證 。

血清的篩選驗證主要包括 ：形態驗證 、增殖能力測試和克隆形成能力測試 。尊龍凱時通過多次傳代 ，分辨同細胞 、同代次 、不同血清樣品培養的細胞形態間的細微差異 ；或者同血清樣品 、不同細胞 、不同代次間 ，細胞形態維持的情況 。尊龍凱時通過同一細胞多次傳代 ，每代接種相同細胞量 ，間隔相同時間後計數得到單位時間倍增數 ，確定增殖性能 。又通過不同細胞在相同培養麵積內接種相同的少量的細胞 ，根據形成的單克隆數量 、大小 ，判斷血清支持克隆形成的能力 。

一款血清需要綜合達到這幾個性能的高水平表現 ，才能稱為好血清 。或者一款血清在培養某種細胞時 ，這幾個方麵的表現都優秀 ，才是最適用的 。