製備

細胞要在液氮中冷凍 ，所以要確保你的罐中充滿氮氣並且你有空間 。細胞應該是健康的（> 90％生存力）並且在對數期生長 。您還需要無菌1 mL低溫小瓶; 它們有螺旋蓋和橡膠密封 ，以防止氮氣流出 。

凍存 

1. 在血細胞計數器中計數細胞 。在離心機中在“2”上離心10mL細胞10分鍾 ，並重懸於細胞凍存液 ，凍存液一般為 ：

   1.培養基 ：血清 ：DMSO=7 ：2 ：1
   2.血清 ：DMSO=9 ：1
   普通細胞係可以用第一種配方凍存，比較嬌貴的細胞係用第二種配方凍存 ，如果實驗室條件允許的話 ，可以都用第二種方法

2. 有些細胞不適合用通用凍存方式 ，詳細請參考  細胞凍存液配方 ，或者在尊龍凱時官網直接搜索細胞 ，下方會有詳細培養注意事項 。

   濃度為2×10e6細胞/0.5mL冷凍培養基 。在低溫小瓶中等分0.5 mL /小瓶 。

3. 將小瓶直立放入發泡膠盒中並蓋好 。置於-70°C下24小時 。

4. 將小瓶放入棒中並放入液氮容器中 。

複蘇

製備

1. 溫水浴至37°C 。

2. 將10 mL培養基（RPMI ，DMEM）置於無菌的15 mL離心管中 。將2 mL FBS層緩慢地塗在管底部 ，這樣就可以看到兩層 。

3. 為您的新文化打造成長媒介 。對於單克隆抗體 ，這將是含有20％FBS和青黴素 - 鏈黴素的DMEM。

解凍

1. 將細胞從氮氣儲存中取出 ，並在37°C水浴中旋轉快速解凍。

2. 用70％乙醇對小瓶外部進行消毒 ，帶入培養罩並緩慢加入到您準備的分層培養基的頂部 。細胞應落到培養基和FBS之間的界麵 。

3. 在“3”上離心10分鍾 。在臨床離心機中 。

4. 吸取上清液並重新懸浮在您之前製備的生長培養基中 。吸取到的CO一個T25和地點2 孵化器為您的新的文化發展 。