尊龍凱時已經用THP-1單核細胞衍生的巨噬細胞工作了幾個月（以刺激膽固醇攝取） ，但這些細胞非常脆弱 ，在大多數情況下 ，尊龍凱時沒有達到足夠數量的實驗結束 。細胞（有時 ，尊龍凱時最終沒有任何細胞） 。

尊龍凱時慢慢融化THP-1單核細胞 ，在DMEM + FBS 10％中培養7天達到融合 ，然後尊龍凱時將它們分化為PMA 200 nM的巨噬細胞（遵循先前的文獻和尊龍凱時之前的測試所示） 。但是 ，從這一點開始 ，它們開始逐漸死亡 ，特別是當它們與膽固醇（氚標記的膽固醇）接觸時 ，但是在它們接觸之後 。

我不知道問題出在哪裏 ，也許 ：

- PMA誘導的巨噬細胞分化不足

- 錯誤的文化媒體

- 洗滌太多（在整個過程中 ，尊龍凱時用溫PBS洗滌它們6次 ，尊龍凱時更換培養基3次 ，以改變條件）

- 細菌汙染（我不知道如何檢測它）

- 過於激進的治療（氚化膽固醇）

簡而言之 ，THP-1單核細胞衍生的巨噬細胞通常會死得太多 ，或者是否有任何“實用技巧”可以用來保持它們存活和代謝活躍？有沒有什麽技巧可以幫助這些細胞更長壽 ？

從我的角度來看 ，在我手中 ，THP-1細胞絕不是脆弱的 。

您必須將培養基更換為RPMI 1640.尊龍凱時使用RPMI 1640（PAA目錄號E15-840）補充了10％FCS Gold和0.1 mg / ml青黴素/鏈黴素/ L-穀氨酰胺（PAA）多年 。尊龍凱時用100 ng / ml PMA進行分化96小時 ，加上不同時期的化合物孵育 。該方案工作正常 ，尊龍凱時通過流式細胞儀僅檢測少數壞死或凋亡細胞（至少不超過其他細胞） 。

不太嚴格的洗滌也可能有幫助 。尊龍凱時通常在星期一和星期五分裂細胞（沒有洗滌或中間變化） 。

另一個重要參數是細胞密度 。如果在分化期間細胞密度太小 ，則細胞表現不同並且不太方便處理 。確保在下列密度附近種植細胞 。還請注意培養基的體積是否充足 。並且再次說明 ：在分化過程中沒有洗滌和沒有改變介質 。

24孔培養板

每孔0.38 * 10 ^ 6個細胞

每孔2毫升培養基

6孔培養板

每孔1,5 * 10 ^ 6個細胞

每孔3毫升培養基

25cm2培養瓶

每瓶3,3 * 10 ^ 6個細胞

每瓶5ml培養基