細胞凍存液比例 :
凍存液配製
:
20%胎牛血清、10%DMSO
、70%1640培養液;或90%血清
、10%DMSO
,更可防止細胞內冰晶形成
。
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性
,分子量小
、溶解度大
、易透過細胞膜,降低細胞外未結冰溶液中溶質濃度
,使細胞免受高濃度溶質的損傷,細胞內水分也不會過分外滲
,避免了細胞過分脫水皺縮
;DMSO與水分子結合
,可使冰點下降
,減少細胞內冰晶的形成
,從而減少冰晶損傷.
FBS :DMSO 不是必須9 :1, 這種方式太奢侈了 ,FBS很貴 ,且一般務必要 ,除非是貴重的淋巴細胞等 。 一般用完全培養基(含10-20%FBS)與DMSO按一定比例凍存,例如9 :1 或95 :5凍存 ,有一定偏差也是可以的 。
另外 ,還有一些是無血清培養的細胞 ,也不能添加血清 ,這時就用無血清培養基(根據細胞特性定製的培養基)加入5-10%的DMSO來凍存 。
總之 ,不是必須FBS:DMSO=9 :1, 那是很古老的文獻資料裏常提到的凍存方案 。
細胞類型和細胞株個體特性 。不同細胞有其最佳凍存條件 ,不盡相同 ,需參考說明書和文獻 。如果發現細胞凍存後狀態不佳 ,需要自己摸條件 ,或考慮汙染和培養條件問題 。