MCF-7培養方案 ：

使用Eagle's MEM ，補充10％FBS ，1％青黴素/鏈黴素 。還可以添加非必需氨基酸（0.1 mM） ，胰島素（10ug / mL）和丙酮酸鈉（1mM） 。向培養基中加入10nM雌激素 ，使細胞數增加3-4倍 。在潮濕 ，濃縮的CO2（5％）氣氛中保持37°C的溫度 。

一旦MCF-7細胞在平板上達到約90％匯合 ，通過用1xPBS衝洗兩次來除去培養基和傳代細胞 。

向細胞中加入2-3mL溫熱（37℃）0.25％胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液以分散細胞層 。在倒置顯微鏡下觀察 。分散應該在5到15分鍾之間發生 。如果細胞沒有正確分離 ，將燒瓶放回37°C孵育室 。不要孵育超過3分鍾左右 。注意 ：在分散過程中 ，不要通過敲擊或搖動燒瓶來攪拌冷藏 。當細胞脫落時 ，這可能導致結塊 。

一旦MCF-7細胞層分散（在37℃下3分鍾） ，通過在無菌管中向10mL完全生長培養基（參見步驟1）中加入5ml細胞/胰蛋白酶-EDTA使胰蛋白酶失活 。輕輕吹打吸出細胞

將細胞在125xg力下在生長培養基中離心5分鍾 。

從管中取出胰蛋白酶/生長培養基懸浮液 。

將沉澱（MCF-7細胞）重懸於10 mL新鮮生長培養基中（參見步驟1）

將1mL懸浮液加入到含有9mL原始生長培養基的每個新平板中（參見步驟1） ，並在37℃下在潮濕的5％CO 2氣氛中孵育 。

建議采用1 ：3或1 ：6的傳代培養比例

如上所述 ，尊龍凱時使用DMEM ，但含有5％FBS（且不含抗生素或胰島素） 。說實話 ，任何生長培養基都適用於這些細胞 。至於抗生素和胰島素 - 它們是不必要的 。由於曆史原因 ，胰島素已被包括在許多乳腺培養物中 。如果您使用胰島素與無胰島素進行“並排”比較 ，您將看到沒有差異（正如尊龍凱時所做的那樣） 。此外 ，關於胰蛋白酶消化 ，尊龍凱時常規使用0.05％胰蛋白酶-EDTA並在T75中加入2mL 2-3分鍾 ，然後用全培養基中和 。這一直對尊龍凱時有利 。

MCF-7細胞直達。