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小秋分享 :細胞培養時注意事項(下)

收到凍存細胞後如何處理 ?
1 、首先 ,收到細胞時 ,請檢查泡沫箱內幹冰是否剩餘 、細胞凍存管是否有解凍情況 ,若出現細胞解凍情況 ,請拍照 ,並及時與技術支持聯係(所拍照片將作為售後服務依據) ;若細胞凍存管正常 ,細胞株請盡速開始培養或立即凍存保存(置於-80℃冰箱 ,隔夜放置後 ,移至液氮罐中保存) ,需要時 ,複蘇培養即可 。
2 、準備好37℃水浴鍋 ,並準備好細胞完全培養基(溫育至37℃) ;
3 、在15ml離心管中加入9ml細胞完全培養基(溫育至37℃) ;
4 、將裝有凍存細胞的凍存管從液氮罐中取出 ,立即放入37℃水浴中 ;
5、在37℃水浴中快速晃動細胞凍存管 ,使得凍存管中內容物盡快融化 ;仔細觀察 ,待凍存管中內容物完全融化後取出 ;注意 :①盡可能避免水沒過管帽 ,以減少汙染的風險 ;②要快速完成細胞複蘇過程(盡量控製在1分鍾內) ,融化過程時間過長 ,會造成複蘇後細胞活性較差 。
6 、用70%75%酒精消毒凍存管外壁 ,在超淨台中打開凍存管 ,用吸管/移液器將細胞凍存懸液移入裝有9ml細胞完全培養基的15ml離心管中(在這一過程請盡可能避免產生氣泡) 。
7 、為了減少細胞損失 ,往細胞凍存管中加入1ml完全培養基 ,稍微吹打 ,用吸管/移液器將這1ml的細胞懸液吸入離心管中 ,再用吸管/移液器將離心管中的細胞輕輕吹打混勻 。
8 、以250×g的離心力(約1200-1350rpm)將細胞懸液離心3-5分鍾 。
9 、離心後 ,檢查上清液是否清澈 ,有無完整的細胞沉澱 ;在超淨台內 ,盡量去除上清液 ,向細胞沉澱物加入1-2ml的完全培養基(溫育至37℃) ,輕輕吹打混勻 。
10 、將細胞全部接種至1T25細胞培養瓶或60mm無菌塑料培養皿中 ,加入6-8ml細胞完全培養基 ;輕輕搖晃細胞培養器皿 ,使細胞均勻分布 。
11 、置於37℃ 、5%CO2 、飽和濕度的恒溫培養箱中靜置培養 。
12 、之後 ,參照細胞說明書換液頻率給細胞換新鮮的完全培養基(溫育至37℃) ,直到細胞達80%的匯合度 ;當細胞達80%-90%的匯合度 ,可參照細胞說明書傳代比例進行消化 、傳代 。
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