收到凍存細胞後如何處理
?
1
、首先
,收到細胞時
,請檢查泡沫箱內幹冰是否剩餘
、細胞凍存管是否有解凍情況
,若出現細胞解凍情況
,請拍照
,並及時與技術支持聯係(所拍照片將作為售後服務依據)
;若細胞凍存管正常
,細胞株請盡速開始培養或立即凍存保存(置於-80℃冰箱
,隔夜放置後
,移至液氮罐中保存)
,需要時
,複蘇培養即可
。
2
、準備好37℃水浴鍋
,並準備好細胞完全培養基(溫育至37℃)
;
3
、在15ml離心管中加入9ml細胞完全培養基(溫育至37℃)
;
4
、將裝有凍存細胞的凍存管從液氮罐中取出
,立即放入37℃水浴中
;
5、在37℃水浴中快速晃動細胞凍存管
,使得凍存管中內容物盡快融化
;仔細觀察
,待凍存管中內容物完全融化後取出
;注意
:①盡可能避免水沒過管帽
,以減少汙染的風險
;②要快速完成細胞複蘇過程(盡量控製在1分鍾內)
,融化過程時間過長
,會造成複蘇後細胞活性較差
。
6
、用70%—75%酒精消毒凍存管外壁
,在超淨台中打開凍存管
,用吸管/移液器將細胞凍存懸液移入裝有9ml細胞完全培養基的15ml離心管中(在這一過程請盡可能避免產生氣泡)
。
7
、為了減少細胞損失
,往細胞凍存管中加入1ml完全培養基
,稍微吹打
,用吸管/移液器將這1ml的細胞懸液吸入離心管中
,再用吸管/移液器將離心管中的細胞輕輕吹打混勻
。
8
、以250×g的離心力(約1200-1350rpm)將細胞懸液離心3-5分鍾
。
9
、離心後
,檢查上清液是否清澈
,有無完整的細胞沉澱
;在超淨台內
,盡量去除上清液
,向細胞沉澱物加入1-2ml的完全培養基(溫育至37℃)
,輕輕吹打混勻
。
10
、將細胞全部接種至1個T25細胞培養瓶或60mm無菌塑料培養皿中
,加入6-8ml細胞完全培養基
;輕輕搖晃細胞培養器皿
,使細胞均勻分布
。
11
、置於37℃
、5%CO2
、飽和濕度的恒溫培養箱中靜置培養
。
12
、之後
,參照細胞說明書換液頻率給細胞換新鮮的完全培養基(溫育至37℃)
,直到細胞達80%的匯合度
;當細胞達80%-90%的匯合度
,可參照細胞說明書傳代比例進行消化
、傳代
。
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