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細胞培養基常見成分及作用功能介紹

能量來源

每一個生長培養基都需要碳源,以供細胞新陳代謝 。碳源通常是葡萄糖 ,但也可以是其他糖類 ,如半乳糖 、己糖 、果糖或其他碳源(如丙酮酸 ,穀氨酰胺) 。葡萄糖通常以終濃度為5.5 mM的含量添加 ,大約等於人體血液中的葡萄糖水平 。然而 ,你可以購買葡萄糖濃度變化範圍很廣的培養基來滿足你的具體需求 。你甚至可以購買不含葡萄糖的培養基 ,然後自己定製濃度 ,模擬高糖的糖尿病狀況 ,或者研究低糖應激反應 。


緩衝液

細胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4 ,否則它們無法最好地發揮細胞功能 ,以供生長和存活 。在二氧化碳含量較高的培養器中 ,二氧化碳與水發生反應 ,產生氫離子 ,使培養基酸化 。為了中和二氧化碳產生的酸度 ,並在培養基中保持最佳pH值 ,大多數培養基都使用化學緩衝係統 。然而 ,一些緩衝方法會幹擾細胞生長 。

哺乳動物細胞最常見的緩衝係統是碳酸氫鈉 ,生物影響最小 。碳酸氫鈉與氫離子反應生成二氧化碳 ,隔離它們以保持pH值 。然而 ,碳酸氫鈉的一個缺點是 ,它在生理pH值上不是最佳的緩衝效果 。為了避免這個問題,研究人員經常使用替代品 ,如HEPES ,增加某些培養基類型的緩衝能力 。

酚紅

由於維持pH值對細胞培養至關重要 ,許多培養基配方包括一種名為酚紅的pH指示劑 ,其在酸性條件下變黃(< 6.8) ,在基本條件下呈粉紅色(> 8.2) 。雖然通常不是問題 ,但酚紅可以模擬雌激素 ,因此 ,當培養表達雌激素受體的細胞類型時 ,通常被排除在外 。沒有酚紅的培養基可以用於比色測定 ,如MTT細胞增殖實驗 ,苯酚的色譜可能會幹擾光譜光度測量的讀數 ,從而使結果混淆 。

血清

對許多培養體係來說 ,一個重要組成部分是血清 ,通常是胎牛血清 ,稱為FBS 。血清來自於血液 ,是糖 、鹽 、脂類 、生長因子等許多成分的混合物 。由於它的生物來源 ,很難維持再生性 ,因為每一批血清都是獨一無二的 。為了規避這一問題 ,一些實驗室使用化學定義的血清替換物 ,一些實驗室則購買一整批次的特定的血清 ,以確保一致的結果 。

代謝物 ,維生素和礦物質

DMEM的成分列表主要分為三大類 :氨基酸、維生素/輔因子和無機鹽(包括鈣和鎂) 。許多這些成分在所有細胞培養基中都是常見的 ,而精確的組合和濃度已經對細胞生長進行了優化 。盡管如此 ,許多實驗室還是選擇用額外的非必需氨基酸補充他們的培養基 ,以防止細胞使用葡萄糖或穀氨酰胺來合成 。此外 ,一些公司生產無鎂和鈣的培養基用於特定的研究 ,選擇時請仔細查看 。 

抗生素

很多實驗室都在他們的細胞培養中加入抗生素 ,以防止不需要的細菌或真菌的生長 ,即使是無菌工作 。最常用的抗菌補充劑是青黴素和鏈黴素(pen / strep)的組合 ,在完整細胞培養基中 ,終濃度為青黴素50-100 IU/ mL和鏈黴素50 -100 g/ mL 。然而 ,一些實驗室選擇不使用抗生素 ,因為抗生素會對細胞產生不必要的影響 ,或者可以掩蓋低水平的細菌汙染 。根據需要 ,你可以決定是否在培養基中使用抗生素 。

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