能量來源
每一個生長培養基都需要碳源,以供細胞新陳代謝
。碳源通常是葡萄糖
,但也可以是其他糖類
,如半乳糖
、己糖
、果糖或其他碳源(如丙酮酸
,穀氨酰胺)
。葡萄糖通常以終濃度為5.5 mM的含量添加
,大約等於人體血液中的葡萄糖水平
。然而
,你可以購買葡萄糖濃度變化範圍很廣的培養基來滿足你的具體需求
。你甚至可以購買不含葡萄糖的培養基
,然後自己定製濃度
,模擬高糖的糖尿病狀況
,或者研究低糖應激反應
。
緩衝液
細胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4
,否則它們無法最好地發揮細胞功能
,以供生長和存活
。在二氧化碳含量較高的培養器中
,二氧化碳與水發生反應
,產生氫離子
,使培養基酸化
。為了中和二氧化碳產生的酸度
,並在培養基中保持最佳pH值
,大多數培養基都使用化學緩衝係統
。然而
,一些緩衝方法會幹擾細胞生長
。
哺乳動物細胞最常見的緩衝係統是碳酸氫鈉
,生物影響最小
。碳酸氫鈉與氫離子反應生成二氧化碳
,隔離它們以保持pH值
。然而
,碳酸氫鈉的一個缺點是
,它在生理pH值上不是最佳的緩衝效果
。為了避免這個問題,研究人員經常使用替代品
,如HEPES
,增加某些培養基類型的緩衝能力
。
酚紅
由於維持pH值對細胞培養至關重要
,許多培養基配方包括一種名為酚紅的pH指示劑
,其在酸性條件下變黃(< 6.8)
,在基本條件下呈粉紅色(> 8.2)
。雖然通常不是問題
,但酚紅可以模擬雌激素
,因此
,當培養表達雌激素受體的細胞類型時
,通常被排除在外
。沒有酚紅的培養基可以用於比色測定
,如MTT細胞增殖實驗
,苯酚的色譜可能會幹擾光譜光度測量的讀數
,從而使結果混淆
。
血清
對許多培養體係來說
,一個重要組成部分是血清
,通常是胎牛血清
,稱為FBS
。血清來自於血液
,是糖
、鹽
、脂類
、生長因子等許多成分的混合物
。由於它的生物來源
,很難維持再生性
,因為每一批血清都是獨一無二的
。為了規避這一問題
,一些實驗室使用化學定義的血清替換物
,一些實驗室則購買一整批次的特定的血清
,以確保一致的結果
。
代謝物
,維生素和礦物質
DMEM的成分列表主要分為三大類
:氨基酸、維生素/輔因子和無機鹽(包括鈣和鎂)
。許多這些成分在所有細胞培養基中都是常見的
,而精確的組合和濃度已經對細胞生長進行了優化
。盡管如此
,許多實驗室還是選擇用額外的非必需氨基酸補充他們的培養基
,以防止細胞使用葡萄糖或穀氨酰胺來合成
。此外
,一些公司生產無鎂和鈣的培養基用於特定的研究
,選擇時請仔細查看
。
抗生素
很多實驗室都在他們的細胞培養中加入抗生素
,以防止不需要的細菌或真菌的生長
,即使是無菌工作
。最常用的抗菌補充劑是青黴素和鏈黴素(pen / strep)的組合
,在完整細胞培養基中
,終濃度為青黴素50-100 IU/ mL和鏈黴素50 -100 g/ mL
。然而
,一些實驗室選擇不使用抗生素
,因為抗生素會對細胞產生不必要的影響
,或者可以掩蓋低水平的細菌汙染
。根據需要
,你可以決定是否在培養基中使用抗生素
。