細胞生長緩慢的常見原因:
(1)培養基可能缺乏細胞生長所需的某種因子
。
通常情況下
,當小夥伴購買細胞
,並沒有按照ATCC或國內細胞庫推薦的方法製備培養基
,使用實驗室兄弟姐妹使用的培養基來培養細胞
。解決方法一般是按照推薦的方法製備培養基
,或直接購買培養細胞的培養基
。(B)細菌
、支原體
、真菌等汙染:雖然培養基中通常添加雙抗體(青黴素和鏈黴素)
,但如果無菌操作觀念不強
,仍有可能造成汙染
。處理方法:如果有冷凍細胞
,可以丟棄汙染細胞
。當然
,丟棄並不是隨意的
,扔進垃圾桶
。應按照實驗室生物安全規定進行
。然後複蘇培養物
,建議培養箱完全消毒
。
如果不冷凍
,而且這種細胞非常珍貴
,常用的治療方法是藥物治療:細菌汙染加5-10倍的抗生素;真菌汙染加抗真菌藥物;支原體汙染再加上抗支原體藥物
,具體藥物可以谘詢技術支持
,他們會更加專業
。
(C)許多細胞的生長依賴於密度
。如果傳代後細胞密度過小
,也會影響細胞生長
。這段時間沒有什麽特別好的
,就是更換液體
。如果細胞培養瓶為T75
,則可以消化
、離心
、複蘇
,然後接種到T25瓶中
。
(4)冷凍細胞中添加DMSO(二甲基亞碸)的量不正確
,沒有逐漸梯度冷卻
。下一次恢複後的細胞總是壞的
。處理方法:按推薦的冷凍保存方法製備冷凍液
。部分細胞適合10% DMSO
,部分細胞適合5% DMSO;嚴格遵循漸變冷卻的原則
,細胞恢複後迅速解凍
。
(5)換液間隔時間太長
。一些小夥伴真的把細胞“佛”係生長
。當他們想到它的時候
,才會換下液體
,相信一個句子
。“你已經是一個成熟的細胞了
。你應該學會養活自己
,成長”
。在這種情況下
,細胞培養瓶中積累了大量的細胞代謝廢物
,影響細胞活性
。推薦:勤奮點
(6)細胞的“消化”時間不宜過長
,減少對細胞的損傷;此外
,EDTA一般添加到胰腺酶中
,螯合鈣離子
,影響細胞粘附
。治療方法:控製細胞“消化”時間
,盡量去除幹淨的胰蛋白酶和EDTA
。
PH值:細胞需要在一定的PH值下生長
,這個小朋友知道
。但是很多時候PH值是尊龍凱時忽略的東西
,這也是想強調的一點
。隨著使用時間的增加
,尊龍凱時使用的介質可能會慢慢變成堿性!(當然
,它也可能變酸
,但改變堿是常見的)
。一般來說
,過堿的培養基會影響細胞的生長
。治療:簡單的方法就是更換新鮮的培養基!當然
,如果你有時間和條件
,你可以調整介質的pH值
。