1.支原體汙染的普遍性
支原體汙染是細胞培養領域遇到的性問題
,據文獻報道
,綜合美國食品藥品監督管理局(FDA)
、美國模式菌種收集中心(ATCC)等機構收到的相關數據
,世界各國細胞係支原體汙染的平均比例為30-60%
。該數據未統計中國大陸的數據
,但可以確定
,大陸地區的支原體汙染比例與此相當
,或更嚴重
。
2.支原體汙染的危害
根據已發表的支原體汙染研究文獻
,支原體汙染細胞後
,幾乎能影響每一個細胞參數
。
1)支原體汙染可能導致細胞染色體的異常和損傷
,改變細胞的代謝
、生長
、形狀
、附著
。
2)支原體影響被汙染細胞的基因表達
。相關研究表明
,支原體汙染的細胞係與對照組比較
,有多達200個基因表達差異達2倍以上
。
3)導致MTT等細胞毒性實驗結果嚴重錯誤
。支原體對MTT有額外還原作用
。
4)支原體汙染能耗盡營養物
,促進代謝積累
,重度支原體汙染導致pH改變
。
5)誘導或抑製細胞因子表達
,並改變培養細胞的代謝
、增殖特征及形態
。支原體汙染可以直接影響L-arginine的代謝
6)支原體汙染可以誘導樹突狀細胞成熟
,這對於開展人體免疫細胞的腫瘤治療的影響將是災難性的
。
3.支原體汙染的隱蔽性
支原體大小約0.1-0.6微米
,體積比病毒稍大
,輕度到中度的支原體汙染不會明顯改變細胞培養液的渾濁度和pH值
,也不會導致細胞形態或生長速度的明顯改變
,所以科研人員很難及時發現體外培養的細胞已經被支原體汙染
,進而改變了基因表達譜
,顯示虛假的實驗數據和實驗結果
。通常情況下
,如果不排除支原體汙染因素
,很多實驗結果往往缺乏說服力
。2013年
,Ding級期刊《Nature》明確要求
,在涉及細胞培養的科研工作中
,必須進行支原體檢測,並排除其影響
。