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支原體汙染對細胞培養的危害 !

1.支原體汙染的普遍性

支原體汙染是細胞培養領域遇到的性問題 ,據文獻報道 ,綜合美國食品藥品監督管理局(FDA) 、美國模式菌種收集中心(ATCC)等機構收到的相關數據 ,世界各國細胞係支原體汙染的平均比例為30-60% 。該數據未統計中國大陸的數據 ,但可以確定 ,大陸地區的支原體汙染比例與此相當 ,或更嚴重 。

2.支原體汙染的危害

根據已發表的支原體汙染研究文獻 ,支原體汙染細胞後 ,幾乎能影響每一個細胞參數 。

1)支原體汙染可能導致細胞染色體的異常和損傷 ,改變細胞的代謝 、生長 、形狀 、附著 。

2)支原體影響被汙染細胞的基因表達 。相關研究表明 ,支原體汙染的細胞係與對照組比較 ,有多達200個基因表達差異達2倍以上 。

3)導致MTT等細胞毒性實驗結果嚴重錯誤 。支原體對MTT有額外還原作用 。

4)支原體汙染能耗盡營養物 ,促進代謝積累 ,重度支原體汙染導致pH改變 。

5)誘導或抑製細胞因子表達 ,並改變培養細胞的代謝 、增殖特征及形態 。支原體汙染可以直接影響L-arginine的代謝

6)支原體汙染可以誘導樹突狀細胞成熟 ,這對於開展人體免疫細胞的腫瘤治療的影響將是災難性的 。

3.支原體汙染的隱蔽性

支原體大小約0.1-0.6微米 ,體積比病毒稍大 ,輕度到中度的支原體汙染不會明顯改變細胞培養液的渾濁度和pH值 ,也不會導致細胞形態或生長速度的明顯改變 ,所以科研人員很難及時發現體外培養的細胞已經被支原體汙染 ,進而改變了基因表達譜 ,顯示虛假的實驗數據和實驗結果 。通常情況下 ,如果不排除支原體汙染因素 ,很多實驗結果往往缺乏說服力 。2013年 ,Ding級期刊《Nature》明確要求 ,在涉及細胞培養的科研工作中 ,必須進行支原體檢測,並排除其影響 。

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