一
、取材的基本要求
1.取材要注意新鮮和保鮮
2.應嚴格無菌
3.防止機械損傷
4.去除無用組織和避免幹燥
5.應注意組織類型
、分化程度
、年齡等
6.作好記錄
二
、各類組織的取材技術
皮膚和粘膜的取材
內髒和實體瘤的取材
血液細胞的取材
骨髓
、羊水
、胸/腹水細胞取材
動物組織取材
人胚體組織取材
雞(鴨)鳥類胚胎組織取材
皮膚和粘膜的取材
主要取自於手術過程中的皮片
,方法似外科取斷層皮片手術操作
,但麵積一般2~4c㎡
。
內髒和實體瘤的取材
內髒除消化道外基本是無菌的
,但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位
,實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區域
,要避開破潰
、壞死液化部分
,以防汙染
,盡量去除混雜的結締組織
。
血液細胞的取材
血細胞
、淋巴細胞的取材
,一般多抽取靜脈外周血
,或從淋巴組織中(如脾
、扁桃體
、胸腺
、淋巴結等)分離細胞
,取材時應注意抗凝
。
骨髓
、羊水
、胸/腹水細胞取材
嚴格無菌
,注意抗凝
,還要盡快分離培養
,離心後
,用無鈣
、鎂PBS洗兩次
,再用培養液洗一次後即可培養
,不宜低溫存放
。
動物組織取材
鼠胚組織取材
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物
,然後將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中
,5min後(注意時間不能太長,以避免酒精從口或其他通道進入體內
,影響組織活力)
,取出動物
,在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢
,切開皮膚
,用無菌操作法解剖取胚或用無菌止血鉗挾起皮膚
、用無菌眼科剪沿軀幹中部環形剪開皮膚
,用止血鉗分別挾住兩側皮膚拉向頭尾
,把動物反包
,暴露軀幹
,然後再固定
,更換無菌解剖器材
,采用無菌操作法解剖取出胚胎
。
幼鼠胚腎(或肺)取材
幼鼠采用上述方法處死消毒後
,腹部朝上固定在木板上
,先切開遊離毛皮並拉開至兩側
:然後采用無菌法打開胸腔取肺
,或背部朝上固定在木板上
,先將背部毛皮切開遊離並拉向兩側
,然後采用無菌法從背部打開腹腔取腎
。
人胚體組織取材
取材方法與鼠類相同
雞(鴨)鳥類胚胎組織取材步驟
(1)取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋
,用照蛋燈在暗處燈檢
,若有豐富血管
、胚體有運動的胚蛋
,說明胚體發育良好
,並用有色筆劃出氣室和胚體位置
。
(2)將胚蛋置於蛋架上
,先用溫水清洗蛋殼
,再用75%酒精棉球擦幹
;
(3)經碘酒
、75%酒精消毒後
,在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室
,沿氣室邊緣去除蛋殼
;
(4)用眼科鑷撕去殼膜
,暴露出雞胚
;
(5)用彎頭鑷輕挑起胚頭
,取出胚胎
,放入無菌平皿中
,解剖取材
。