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細胞培養前的需做哪些準備工作 ?

實驗人員的無菌準備 :
1.肥皂洗手 。
2.穿好隔離衣 、帶好隔離帽 、口罩 、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦淨雙手 。

無菌操作的演示 :
1.凡是帶入超淨工作台內的酒精 、PBS 、培養基 、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表麵
2.靠近酒精燈火焰操作 。
3.器皿使用前必須過火滅菌
4.繼續使用的器皿(如瓶蓋 、滴管)要放在高處 ,使用時仍要過火 。
5.各種操作要靠近酒精燈 ,動作要輕 、準確 ,不能亂碰 。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管 ,防止交叉汙染 。

準備室的設備 :
單蒸餾水蒸餾器 、雙蒸餾水蒸餾器 、酸缸 、烤箱 、高壓鍋 、儲品櫃(放置未消毒物品) 、儲品規(放置消毒過的物品) 、包裝台 。配液室的設備 :扭力天平和電子天平(稱量藥品) 、PH計(測量培養用液PH值) 、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液) 。

培養室的設備 :
液氮罐 、儲品櫃(存放雜物) 、日光燈和紫外燈 、空氣淨化器係統 、低溫冰箱(-80℃) 、空調 、二氧化碳缸瓶、邊台(書寫實驗記錄) 。必須放在無菌間的設備 :離心機(收集細胞) 、超淨工作台 、倒置顯微鏡 、CO2孵箱(孵育培養物) 、水浴鍋 、三氧消毒殺菌機 、4℃冰箱(放置serum和培養用液) 。

無菌室的滅菌 :
1.定期打掃無菌室 :每周打掃一次 ,先用自來水拖地 、擦桌子 、超淨工作台等 ,然後用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭 。
2.CO2孵箱(培養箱)滅菌 :先用3‰新潔爾滅擦拭 ,然後用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸 ,再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌 :打開紫外燈 、三氧殺菌機 、空氣淨化器係統各20-30分鍾
4.實驗後滅菌 :用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超淨台 、邊台 、倒置顯微鏡的載物台 。

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