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細胞培養中培養基的作用
1.液體培養基貯存於4℃ 冰箱 ,避免光照 ,實驗進行前放在37℃ 水槽中溫熱 。0S' 、

2.液體培養基(加血清)存放期為六個月 ,期間glutamine可能會分解 ,若細胞生長不佳
可以再添加適量glutamine 。
3.粉末培養基配製(以1升為例) :
3.1.細胞培養基通常須添加10%血清 ,因此粉末培養基之配製體積為900ml ,pH為7.2-7.4 。NaHCO3為另外添加 ,若將NaHCO3粉末直接加入液體培養基中會造成pH之誤差 ,或局部過堿 。因此粉末培養基及NaHCO3粉末應分別溶解後才混合 ,然後用CO2氣體調整pH ,而非用強酸(HCl)或強堿(NaOH) ,因為氯離子對細胞生長可能有影響 ,且貯存時培養基的pH易發生改變 。生物3.2.材料 :純水(milli-Q水或二次至三次蒸餾水 ,水品質非常重要) ,粉末培養基 ,NaHCO3
電磁攪拌器,無菌血清瓶,0.1或0.2mm無菌過濾膜,pH計 ,真空泵 ,CO2氣體 。
3.3.步驟 :
3.3.1.取粉末培養基溶於700mlmilli-Q水中 ,攪拌使其溶解 。
3.3.2.稱取適量之NaHCO3粉末溶於200mlmilli-Q水中 ,攪拌使其溶解 ,然後通入CO2氣體至飽和 ,約3-5分鍾 。
3.3.3.將溶解且含飽和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液體培養基中混合。混後溶液之pH應為7.2-7.4 ,除非pH值偏差太大 ,否則不需用酸堿再調整之 。若為太堿 ,可再通入CO2氣體調整pH 。培養基以真空幫浦通過過濾膜時 ,pH會升高0.1-0.2 。
3.3.4.以0.1或0.2mm無菌過濾膜過濾滅菌 ,同時分裝至無菌容器中 ,標示培養基種類 、日期 、瓶號等 ,貯存於4℃ 。(血清亦可加入培養基中一起過濾)
3.3.5.配製之培養基配製須作生長試驗與汙染測試 。

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