為什麽要進行細胞凍存 ？

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一 。利用凍存技術將細胞置於-196℃液氮中低溫保存 ，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來 ，這樣在需要的時候再複蘇細胞用於實驗 。而且適度地保存一定量的細胞 ，可以防止因正在培養的細胞被汙染或其他意外事件而使細胞丟種 ，起到了細胞保種的作用 。

除此之外 ，還可以利用細胞凍存的形式來購買 、寄贈 、交換和運送某些細胞 。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞碸(DMSO) ，可使溶液冰點降低 ，加之在緩慢凍結條件下 ，細胞內水分透出 ，減少了冰晶形成 ，從而避免細胞損傷 。 

采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活 。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min ，當溫度低於-25℃時可加速，到-80℃之後可直接投入液氮內(-196℃)。

細胞凍存的步驟

（1）選擇處於對數生長期的細胞 ，在凍存前一天最好換液 。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉 ，用0.25% 胰蛋白酶消化 。適時去掉胰蛋白酶 ，加入少量新培養液 。用吸管吸取培養液反複吹打瓶壁上的細胞 ，使其成為均勻分散的細胞懸液 。懸浮生產細胞則不要消化處理 。然後將細胞收集於離心管中離心(1000r/min ，10分鍾) 。
（2）去上清液 ，加入含20%小牛血清的完全培養基 ，於4℃預冷15分鍾後 ，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油 ，用吸管輕輕吹打使細胞均勻 ，細胞濃度為5×10⁶～1×10⁷/mL之間 。
（3）將分裝上述細胞懸液於2ml凍存管中 ，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊 ，並標記好細胞名稱和凍存日期 ，同時作好登記（日期 、細胞種類及代次 、凍存支數） 。
（4）將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中 ，-80℃冰箱過夜 。 ；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜 ，放入液氮罐)最好;或者可以在4℃ ，2h;然後轉到-20℃ ，2h;-80℃ ，2h;放入液氮罐 。
（5）細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見 ，凍存半年後 ，最好取出一隻凍存管細胞複蘇培養 ，觀察生長情況 ，然後再繼續凍存 。

如何進行細胞複蘇

1. 從液氮容器中取出凍存管 ，直接浸入37℃溫水中 ，並不時搖動令其盡快融化 。

2. 從37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ，用吸管吸出細胞懸液 ，加到離心管並滴加10倍以上培養液 ，混勻;

3. 離心 ， 1000rpm ，5min;

4. 棄去上清液 ，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞 ，計數 ，調整細胞密度 ，接種培養瓶 ，37℃培養箱靜置培養;

5. 次日更換一次培養液 ，繼續培養 。