1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件 ？

ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數細胞的詳細資料 。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接 ，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫 。數據庫中有每一種細胞的詳細描述 ，包括細胞的來源 ，培養和凍存條件 ，以及相關文獻等資料 。

2.如何選用特殊細胞係培養基 ？

培養某類型細胞沒有固定的培養條件 。MEM中培養的細胞 ，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長 。總之 ，首選MEM 、DMEM做貼壁細胞培養 ；RPMI1640做懸浮細胞培養 ；新的細胞培養時要詳查資料 。

3.自己新配製的液體培養基能保存多久 ？

尊龍凱時建議將新配製的培養基放置於4℃ ，避光保存盡量在一周內使用完畢。培養基越新鮮越好 。

4.培養基中添加了血清和抗生素後 ，可長期保存嗎 ？

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時 ，您應該在一到兩周內使用它 。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解 。

5.培養基中是否須添加抗生素 ？

除了特殊篩選係統外 ，一般正常培養狀態下 ，培養基中不應添加任何抗生素 。

為防止細菌 、真菌汙染 ，可以加入青黴素-鏈黴素雙抗溶液，其培養基中的終濃度為青黴素100U/ml ，鏈黴素為100ug/ml 。 

6.液體培養基可以放-20℃保存嗎 ？

不可以 ！因為在-20℃下 ，培養基中的鹽容易析出 ，培養基融化後 ，有的鹽可能無法重新溶解 ，從而導致培養基滲透壓降低 ，培養細胞時 ，細胞容易破裂而死亡 。

7.為何培養基保存於4℃冰箱中 ，顏色會偏暗紅色 ，且pH值越來越偏堿性 ？

培養基保存於4℃冰箱中 ， 培養基內之CO2 會逐漸溢出 ，造成培養基越來越偏堿性 。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅 。培養基偏堿之結果 ， 將造成細胞生長停滯或死亡 。若培養基偏堿時 ， 可以通入無菌過濾之CO2 ， 以調整pH 值 。

8.為什麽購買的液體培養基1640顏色發黃 ，是pH值不對嗎 ？

不是 。因為配方原因 ，1640為堿酚紅型 ，其中酚紅的濃度隻有DMEM的四分之一 ，所以是因為酚紅濃度低 ，而非PH值低 。

9.培養液pH是怎樣影響細胞生長的 ？

由於大多數細胞適宜PH值為7.2-7.4 ，偏離此範圍對細胞將產生有害的影響 。各種細胞對PH值要求也不完全相同 ，原代細胞培養一般對PH值變動耐受差 ，無限細胞係耐受力強 。 但總體來說 ，細胞耐酸性比耐堿性強一些 ，偏酸環境中更有利於細胞的生長 。因此 ，配製培養用液時可把液體的PH值稍微調的偏酸一些 。液體在經過0.1um或0.2um濾膜過濾時 ，PH值會向上浮動0.2左右 。

10.培養液滲透壓是怎樣影響細胞生長的 ？

當細胞內 、外環境的分子濃度不同時就會產生滲透壓 。這種情況下 ，水分通過滲透流入或流出細胞 ，從而改變細胞的內環境。高滲透壓迫使水分從細胞中擴散出來導致細胞收縮 ，這種情況會使DNA和蛋白遭到破壞 ，細胞周期停滯以及最終使細胞死亡 ；反之 ，低滲透壓使水分流入細胞內 ，使細胞腫脹破裂 。

11.為什麽有客戶要求培養基中不含酚紅 ？

研究表明 ，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素） 。為避免固醇類反應 ，細胞培養 ，尤其是哺乳類細胞時 ，用不加酚紅的培養基 。由於酚紅幹擾檢測 ，一些研究人員在做流式細胞檢測時 ，不使用加酚紅的培養基 。

12.酚紅的作用是什麽 ？

酚紅在培養基中被用來作為PH值指示劑 ：中性時為紅色 ，酸性時為黃色 ，堿性時為紫色 。

13.幹粉培養基裏含NaHCO3嗎 ？

所有的幹粉培養基中都不含NaHCO3  。請依據說明書或包裝袋上的標注 ，在幹粉培養基完全溶解後添加NaHCO3  。

14.NaHCO3的作用是什麽 ？

與CO2一起形成緩衝係統 ，保持培養基PH值穩定 。

15.尊龍凱時實驗室培養箱CO2濃度一直以來都是5% ，這樣可以嗎 ？

當然不可以 ，不同的培養基要求添加NaHCO3的量不一樣 ，如DMEM要求添加3.7g/L ，為了保持PH值穩定 ，必須用高濃度的CO2平衡 ，一般不低於8% ，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L ，還有些培養基要求添加更少 ，那麽這些培養基就要求較低的濃度平衡 ，一般是5% 。

16.培養基中丙酮酸鈉的作用是什麽 ？

丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源 ，盡管細胞更傾向於以葡萄糖作為碳源 ，但是如果沒有葡萄糖的話 ，細胞也可以代謝丙酮酸鈉 。丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM ，-20℃保存 ，培養基中的終濃度為1mM.

17.穀氨酰胺的作用是什麽 ？

幾乎所有的細胞對穀氨酰胺都有較高的要求 。穀氨酰胺脫掉氨基後 ，可作為培養細胞的能量來源 ，參與蛋白質的合成和能量代謝 。在缺少穀氨酰胺時 ，細胞生長不良而死亡 。所以 ，各種培養液中都含有較大量的穀氨酰胺 。

穀氨酰胺在溶液中很不穩定 ，應置-20℃冰凍保存 ，用前加入培養基中 。加有穀氨酰胺的液體培養基4度冰箱儲存兩周以上時 ，應重新加入原來量的穀氨酰胺 。

18.在培養基中加入HEPES有何好處 ？

培養基中最常用的Buffer system是碳酸氫鹽 ，它可提供營養 ，但卻在生理PH值條件下會降低緩衝能力 。而HEPES是一種很強的Buffer ，加入HEPES能使細胞培養基在PH7.2-7.6條件下緩衝能力增強 。

Hepes的貯存液濃度一般為1M ，常溫保存 。培養基中的終濃度為25mM ，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培養基中 。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什麽 ？培養細胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ ？這個二肽有多穩定 ？

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-穀氨酰胺的衍生物 ，其不穩定的a-氨基用L-丙氨酸來保護 。一種肽酶逐漸裂解二肽 ，釋放L-穀氨酰胺供利用 。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩定 ，即使在121℃滅菌20min ， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解 ；而在相同條件下 ，L-穀氨酰胺幾乎完全降解 。

 L-穀氨酰胺在細胞培養時是重要的 ，但其在溶液中不穩定 ，經過一段時間後會降解 ，確切的降解率一直沒有最終確定 。L-穀氨酰胺的降解導致氨的形成 ，而氨對於一些細胞具有毒性 。因此GlutaMAX-Ⅰ是細胞培養中穀氨酰胺的替代品 。

20.可否使用與原先培養條件不同的培養基 ？

不能 。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基 ，若驟然使用和原先提供之培養條件不同的培養基 ，細胞大多無法立即適應 ，造成細胞無法存活 。