抗體由於性質和所使用的儲存條件不同 ,其存儲的“保質期”可能從幾周到幾年不等 。盡管每個抗體存儲的最佳條件是獨特的 ,但尊龍凱時還是能夠總結出一些關於抗體存儲建議和一般準則 。
抗體的儲存時間取決於抗體固有的性質和儲存條件
。抗體(尤其是酶)必須存放在適當的溫度和pH值範圍
。為了維持蛋白質的活性
、防止其聚集
,經常保存在一定濃度的甘油
,蔗糖
,或類似的物質裏麵
。
1
、低溫儲存對於抗體的保存至關重要
一般來說 ,抗體最好存放在≤4℃的清潔 ,滅菌的玻璃或塑料管 。貯存在室溫下通常會由於微生物的生長導致抗體退化和/或失活 。抗體儲存液放在4℃環境中1天或者幾周內其活性不會受到明顯影響 。另外 ,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲存於-20℃ 。通常尊龍凱時為了避免反複凍融 ,可以分裝抗體 。我還可以加入抗微生物藥物(如疊氮化鈉或硫柳汞)以避免微生物的生長 。
帶有標記的抗體最好存放在終濃度為50%的甘油或乙二醇裏並防止在-20℃的環境中。盡管有些酶結合物可以不加抗凍劑儲存在-20℃ ,但是這些抗體必須分裝使用以防止反複凍融 ,尤其是堿性磷酸酶偶聯對凍融特別敏感 。帶有標記的抗體通常可以在甘油或乙二醇中於-20℃保存1-2年 。但是 ,在冷凍保護劑的汙染物可能會影響酶的活性 。
一些研究人員發現多克隆抗體在血清中於-20℃保存十年其活性損失不大
。然而
,一旦抗體被純化後
,儲存在50%的甘油中於-20℃保存
,即使沒有凍融
,其活性的損失也可以觀察到
,盡管其進程仍然非常緩慢
。但許多研究者需要將這些多克隆抗體注射到動物體內
,為了避免內毒素的幹擾
,一般都不加入甘油
。而且大量研究表明
:即使沒有甘油
,隻要你不反複凍融
,抗體也可以存儲在-20℃幾年甚至幾十年
。另一個重要的事情是
,該抗體濃度應高於1毫克/毫升
,因為稀的抗體容易失去活性而且容易造成物理吸附導致的損失
。而單克隆抗體可以用兩種方式保存
:第一
,保存在50%的甘油存放於-20℃;第二
,也是比較好的方式
,將其保存在飽和硫酸銨於4℃或-20℃(4℃更好)保存
。多年未見有失活
、細菌滋生以及氧化
。有些研究人員為了長期儲存抗體,將抗體分裝後放置於液氮中
。然而抗體存儲在-20℃或-80℃更常見
,因為凍融降低蛋白質的穩定性
,所以尊龍凱時一定要分裝抗體使用
,這樣就可以避免抗體的反複凍融
。而凍幹法(冷凍幹燥
,幹燥或從冰凍狀態)為一些冰凍以後不穩定抗體提供了一種替代的保存方法
。在大多數情況下
,凍幹的抗體最好是存放在-20℃
。雖然冷凍幹燥有許多優點
,它需要昂貴的設備和勞動力
。
2
、向抗體儲存液中加入抗氧化劑是防止抗體因氧化失效的關鍵步驟
氧化反應是某些酶
,尤其是巰基酶的共同問題
。為了防止氧化反應對抗體的破壞
,尊龍凱時可以向抗體中加入一些還原劑(如二硫蘇糖醇(DTT)或2 - 巰基乙醇(2-ME))
。實驗證明
:越高的pH環境和溫度
,這些有酶活性的抗體的保存時間越短
。此外
,加入0.1mM的銅離子其氧化率增加
,而加入金屬螯合劑EDTA增加其保存的有效期
。
3
、蛋白質穩定劑和抗生素對於抗體的穩定儲存也發揮著重要作用
蛋白質穩定試劑可以延長大多數蛋白質在4℃或-20℃的保質期
。而25-50%的甘油或乙二醇等防凍劑有助於穩定抗體
,防止在-20℃環境中形成冰晶,避免其破壞蛋白質的結構
。蛋白酶抑製劑的加入可以防止抗體發生水解反應導致其失活
。而抗微生物藥物
,如最終濃度在0.02-0.05%(W / V)的疊氮化鈉(NaN3的)或終濃度為0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑製微生物的生長。
4
、抗體的儲存濃度對於抗體保存的有效期也有顯著影響
抗體濃度過低(<1毫克/毫升)更容易發生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失 。因此 ,尊龍凱時都要盡量的保持抗體(例如 ,大於1毫克/毫升)在儲存期間的濃度 。通常的做法是添加“載體”蛋白質 ,如純化牛血清白蛋白(BSA)以防止這種降解和損失 。