能量來源
:穀氨酰胺
L-穀氨酰胺是一種氨基酸
,細胞的重要能量來源
、參與蛋白質的合成和核酸代謝
。同時L-穀氨酰胺不穩定
,在中性的水溶液中會自發降解
; 降解產物對細胞有毒性 (對幹細胞
,原代細胞影響尤其大)
。能影響細胞活性
、蛋白表達水平及糖基化模式等
。那如何解決呢
?
方案有二 :
選擇不含穀氨酰胺的培養基 ,自己添加
選擇穩定的穀氨酰胺替代物
經過科學家不斷努力
,終於找到了穩定的穀氨酰胺替代物
: glutaGRO
。它有何方功能呢
?原來
,它是由L-丙氨酸和L-穀氨酰胺縮合形成的二肽
,穩定性高
,可在室溫下保存
,2年穩定 (穀氨酰胺需冷凍保存)
,使用更方便
。同時不易降解
,不產生有毒性氨
,更利於細胞生長
。但仍需注意
:該替代物適於哺乳動物細胞培養
,但不適合昆蟲細胞培養體係
!
!
!
能量來源 : 丙酮酸 (Sodium Pyruvate)
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源
。當葡萄糖不足的時候
,細胞可以代謝丙酮酸鈉
,保證細胞更好地生長
。同時某些對葡萄糖利用存在問題的細胞必需添加哦
。
平衡鹽溶液
平衡鹽溶液主要是由無機鹽 、葡萄糖組成 ;它的作用是維持細胞滲透壓平衡 ,保持pH穩定及提供簡單的營養 ;同時用於取材時組織塊的漂洗 、細胞的漂洗 、配製其他試劑等 。
它由這些小夥伴組成
:PBS 磷酸鹽緩衝液
,DPBS(Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines)
, Earle’s 平衡鹽
, Hank’s 平衡鹽
。
培養基中的pH緩衝劑
絕大多數細胞的最佳生長條件是pH 6.8-7.8 。
多數培養基利用碳酸氫鈉進行緩衝 ,碳酸氫鈉的緩衝需要二氧化碳 。其中高碳酸氫鈉 (1.5 – 3.7g/L) 需要 5 – 10% CO2 ,低碳酸氫鈉(0.35g/L) 不需要二氧化碳孵箱 。當然 ,也有不依賴於二氧化碳的氫離子緩衝劑如 :HEPES,在一定範圍內對細胞無毒性作用 。能較長時間控製恒定的pH範圍 ,保證細胞的良好生長。大家可以根據細胞和實驗要求具體選擇 。