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細胞培養過程中添加劑起什麽作用 ?

能量來源 :穀氨酰胺
L-穀氨酰胺是一種氨基酸 ,細胞的重要能量來源 、參與蛋白質的合成和核酸代謝 。同時L-穀氨酰胺不穩定 ,在中性的水溶液中會自發降解 ; 降解產物對細胞有毒性 (對幹細胞 ,原代細胞影響尤其大) 。能影響細胞活性 、蛋白表達水平及糖基化模式等 。那如何解決呢 ?

方案有二 :

 選擇不含穀氨酰胺的培養基 ,自己添加

選擇穩定的穀氨酰胺替代物

經過科學家不斷努力 ,終於找到了穩定的穀氨酰胺替代物 : glutaGRO 。它有何方功能呢 ?原來 ,它是由L-丙氨酸和L-穀氨酰胺縮合形成的二肽 ,穩定性高 ,可在室溫下保存 ,2年穩定 (穀氨酰胺需冷凍保存) ,使用更方便 。同時不易降解 ,不產生有毒性氨 ,更利於細胞生長 。但仍需注意 :該替代物適於哺乳動物細胞培養 ,但不適合昆蟲細胞培養體係 ! ! !

能量來源 : 丙酮酸 (Sodium Pyruvate)
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源 。當葡萄糖不足的時候 ,細胞可以代謝丙酮酸鈉 ,保證細胞更好地生長 。同時某些對葡萄糖利用存在問題的細胞必需添加哦 。

平衡鹽溶液

平衡鹽溶液主要是由無機鹽 、葡萄糖組成 ;它的作用是維持細胞滲透壓平衡 ,保持pH穩定及提供簡單的營養 ;同時用於取材時組織塊的漂洗 、細胞的漂洗 、配製其他試劑等 。

它由這些小夥伴組成 :PBS 磷酸鹽緩衝液 ,DPBS(Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines) , Earle’s 平衡鹽 , Hank’s 平衡鹽 。

培養基中的pH緩衝劑

絕大多數細胞的最佳生長條件是pH 6.8-7.8 。

多數培養基利用碳酸氫鈉進行緩衝 ,碳酸氫鈉的緩衝需要二氧化碳 。其中高碳酸氫鈉 (1.5 – 3.7g/L) 需要 5 – 10% CO2 ,低碳酸氫鈉(0.35g/L) 不需要二氧化碳孵箱 。當然 ,也有不依賴於二氧化碳的氫離子緩衝劑如 :HEPES,在一定範圍內對細胞無毒性作用 。能較長時間控製恒定的pH範圍 ,保證細胞的良好生長。大家可以根據細胞和實驗要求具體選擇 。


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