血清沉澱是什麽
?
血清中經常會出現肉眼可見的沉澱
,其成分有多種類型
,產生的原因有很多
,主要有纖維蛋白
、磷酸鈣還有一些其它成分
。
1. 纖維蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見的沉澱物大多屬於這一類型 。由於在生產過程中 ,血清采集 、過濾(3 次 0.1 μm過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處於溶解狀態 。但在解凍之後, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集 ,形成肉眼可見的沉澱 。
2. 磷酸鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見的沉澱成分
,通常會造成血清出現雲霧狀渾濁
。當產品在 37℃保存時
,這種現象尤其明顯
,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在
。這些小黑點在布朗運動的作用下四處遊動
,常被誤認為是微生物汙染
。
3. 其他成分(Other)
血清中的其他成分也會形成沉澱
,例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉澱等
。
血清沉澱會影響細胞培養嗎
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1. 細胞生長
尊龍凱時在出廠前都會對血清進行一係列質檢測試 ,確保血清質量達到嚴格標準 。血清測試和細胞培養經驗也表明 ,其沉澱成分不會影響血清作為細胞培養添加物的表現 。這一點得到了眾多客戶和其他血清供應商的肯定 。解凍之後, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集 ,形成肉眼可見的沉澱 。
2. 懷疑汙染
磷酸鈣顆粒經常會被當成微生物汙染而引發不必要的擔憂 。一般情況下 ,當操作人員融化血清後注意到有霧狀渾濁時 ,常將其存放在 4℃冰箱中觀察 ,並考慮接下來是否繼續使用 。但這樣會使沉澱進一步增多 ,反而會使血清更加渾濁 ,進而誤以為存在血清汙染 。並且 ,在倒置顯微鏡下 ,可在血清中觀察到四處遊動的小黑點(磷酸鈣顆粒的布朗運動) ,更容易使人誤以為存在微生物汙染 。
為防止這類誤解的產生
,尊龍凱時不建議客戶培養血清來驗證是否存在汙染
,而是將血清直接接種在細菌培養基上進行培養
,以觀察是否有細菌的增殖
。並且
,進行革蘭氏染色,並在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直接確認是否存在微生物汙染
。
怎樣操作可以盡量避免沉澱出現
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1. 正確解凍
首先 ,應按照逐步解凍的方式正確解凍血清 :從-20℃取出後 ,置於 4℃冰箱緩慢解凍 ,最後置於室溫完成解凍 。如果直接從-20℃拿到室溫或 37 ℃水浴解凍 ,則非常容易產生沉澱 。在解凍過程中 ,請注意時不時緩慢搖晃瓶子 ,減少沉澱的產生 。為避免反複凍融,建議您將血清分裝使用 。
2. 使用和保存注意事項
血清沉澱很難預測和避免 ,出現沉澱後也無需擔憂 ,這並不會影響血清的品質 。已知血清沉澱在以下條件下會有增多的可能 :
1) 熱滅活 ;
2) 37℃培養 ;
3) 反複凍融 ;
4) 伽馬射線照射 ;
5) 2-8℃長期保存 ;
6) 長期保存於可自動化霜的冰箱中(溫度不穩定) 。
總 結 :
血清產品中出現沉澱屬於常見現象 ,但不會影響血清的品質 ,對細胞培養而言也是沒有任何問題的 ,大家可以放心使用 !