細胞生長緩慢是實驗人員在培養細胞時常遇見的問題 ，那麽究竟是哪些因素影響 ？又如何改善呢 ？

一.個別人的培養體係出現問題

1.檢查你所培養的細胞是否存在汙染 。

（a）如果培養細胞未添加抗生素(必須添加!),細胞汙染則是不可避免的 。
1）用肉眼和顯微鏡進行檢查
2）如果細胞被汙染則要棄掉 。

（b）由於支原體汙染不容易覺察到 ，因此必須定期檢測

（c）檢測可能汙染的途徑和原因

2.檢查你用於培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同) 。如果你常規使用的是粉劑或10X儲存液 ，而現在購買的培養基更換為1X液體 ，而隨後證明問題就出自於此 ，處理方法請參見下則分享內容 。

3.如果問題與培養基無關 ，那麽很可能還是細胞的問題 。

（a）複蘇另一支凍存的細胞 ，並且與正在培養的細胞加以比較 。兩種細胞的培養應分開 ，以免在培養之初就產生汙染 。隨後按（b）~ （d）步的方法做排查 。

（b）對傳代培養的細胞進行計數 ，並繪製生長曲線與以前培養該細胞的資料進行比較 ，檢查是否有下列改變:
1）傳代時是否接種密度過低 。

2）細胞傳代是否過於頻繁 。

3）傳代前細胞平台期是否過長 。

（c）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號?檢查批號和供應商 。

（d）是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞?應檢測:

1）胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長 。
2）消化液的濃度和活性是否過高 、過強 。

3）胰蛋白酶消化時 、孵箱溫度是否過高 。
4）吹打消化細胞時是否過於用力 。
5）細胞是否對EDTA過於敏感(如果添加了EDTA) ，
6）胰蛋白酶稀釋是否有誤 。
7）是否使用了一批劣質的胰蛋白酶消化液 。

二.問題較為普遍 ，其他人也遇到同樣的困難

檢查共用的設備和試劑
溫室和孵箱溫度

1.溫度和溫度設定不準 。
（a）自動調溫器損壞 。
（b）開關孵箱門過於頻繁 。
（c）孵箱門未關緊 。
 (d)風扇損壞造成散熱不均 。
用便攜式溫度表重新標定孵箱溫度 。

2.孵箱濕度不能維持
（a）水盤中未加水 ，
（b）孵箱有滲漏 。
（c）開關孵箱門過於頻繁 ，
（d）在Petri培養皿中放置一定量的PBSA,每日稱重 ，以檢查蒸發率 。

3.孵箱的C02濃度不準
（a）開關孵箱門過於頻繁 。
（b）CO2控製器出現問題 。

4.用預先標定的培養基監測箱體內的PH 。

5.用CO2探頭(carborite)檢測孵箱環境 。

6.用標準混合氣重新標定零值和CO2實際值 。

三.實驗室是否發生其他變化?

1.與細胞培養有關的人員是否改變?
（1）培養細胞人員是否發生增減
（2）準備實驗人員是否發生增減
（3）實驗人員的準備過程是否規範
（4）實驗人員是否接受過係統訓練
（5）實驗空間和布局是否過於擁擠

2.細胞培養所需材料是否改變?
（1）供應商

（2）批號

（3）類型

（4）存儲期限

3.細胞培養的操作過程是否有變化？

（1）孵育時間

（2）操作速度

（3）操作順序

（4）位置

（5）範圍大小

4.細胞培養的專業儀器設備是否完好 ？

（1）新近購置 ：是否新添儀器設備 ？

（2）運行狀況 ：是否設備損壞 ？

（3）擺放位置 ：正在使用的儀器是否有足夠的擺放空間 ，是否要移動鄰近的儀器 ？

（4）操作溫度 ：儀器是否在正常的溫度範圍內運轉 ，你的樣品是否也需此溫度範圍 ？