“黑膠蟲”可寄生於動物細胞 ,也可以生存於培養基中 ,依靠細胞和培養基中的營養為生 ,並隨細胞傳代而傳代 。可見“黑膠蟲”是一種異養生物 。尊龍凱時在細胞培養中出現黑膠蟲後汙染怎麽辦 ?下麵有幾個處理建議 ,尊龍凱時一起來了解下吧 !
1.換好一點的血清 ,這樣可以有效減少“小黑點”的形成 。一般的血清都不要去滅活處理,為什麽呢 ?
因為經過正確處理的熱滅活血清 ,對大多數的細胞而言是不需要的 。經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促進 ,或完全沒有任何作用 ,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量 ,而造成細胞生長速率的降低 。而經過熱滅活的血清 ,沉澱物的形成會顯著增多 ,這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點” ,常常會讓研究者誤以為是血清遭受汙染 ,而把血清放在37℃環境中 ,又會使此沉澱物更增多 ,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增 。除非是在做免疫學研究或培養幹細胞 、昆蟲細胞和平滑肌細胞時 ,才推薦做熱滅活 。所以在不是做免疫學研究或培養幹細胞 、昆蟲細胞和平滑肌細胞培養時 ,血清盡量不經熱滅活 。
2.如果是貼壁細胞的話,可用無菌的PBS洗幾次 ,可一定程度上緩解 。若是懸浮的話 ,就不太好處理拉 ,可以向其中少加一點滋養細胞 。加滋養細胞對有黑膠蟲的剛複蘇的細胞很有效 !還有就是實驗環境要注意好 ,保持細胞間整個環境的潔淨度 。如果細胞不是非常珍貴 ,可以用伯氨奎 、磺胺 、四環素 、貝尼爾 ,也有建議慶大黴素500ug/ml洗滌 。
3.換用好的一次性塑料培養瓶 。
4.停止複蘇 ,停止養細胞 ,徹底消毒所有用於細胞培養的一切用品 ,包括所用的培養瓶 ,培養基 ,吸管 ,胰酶 ,孵箱 ,超淨台 、空間等等你能想到的和細胞培養相關的所有物品 。一個星期後 ,再複蘇汙染之前凍存的細胞 ,注意你的白大衣衣袖汙染即可 。這樣你可能覺得動作太大 ,但可以用一個星期的時間挽救兩個月的時間 ,還有其他你為了找到汙染源 ,去除汙染所耗費的精力 ,和財力 。
5.在換液前先加入生理鹽水並輕輕拍打 ,衝洗幹淨後再加入培養液 ,堅持天天洗 ,傳代時加生理鹽水再離心一次 ,接種密度稍大一些 ,一段時間後,蟲子就會大大減少 ,對細胞的生長也不會有大的影響 。
所有東西最好重配 ;如果實在要搶救 ,重點突破 ,留幾瓶汙染不是很嚴重的細胞搶救 ,其餘棄去
6.如果有其它可用的細胞 ,那麽汙染的細胞最好扔掉 ;如沒有,可試著用抗生素 ,最可靠的是細菌培養加藥敏 ,據藥敏結果選擇抗生素 ,當然不能影響到細胞的狀態 。
7.有材料稱minocycline具有一定的作用 ,可以和換液結合起來使用 。
由於黑膠蟲尚未明確鑒定出是什麽生物 ,所以上述的處理方法不一定正確 ,可以供考慮采用 。
8.有人為尋找到殺滅“黑膠蟲”的方法 ,做了一個試驗 ,他取有“黑膠蟲”汙染的六孔板 ,每孔內有2ml培養液 ,向有汙染的孔內分別加入0.5ml 、1ml 、2ml 、3ml的新潔爾滅原液 ,邊加邊在倒置顯微鏡下觀察 。最後他得出結論 :新潔爾滅與水或培養基的比例為1 :4時即可殺死“黑膠蟲” 。但是新潔爾滅對細胞的負麵影響太大 ,比較珍貴的細胞培養最好不采用此方法 。
在細胞培養實驗中 ,人們遇到的黒膠蟲並不都是一樣的 ,有像細菌的 、有像支原體的 、有像原蟲的 、有像真菌的 ,還有像細胞碎片的 。在國內個實驗室的器材條件參差不齊 ,而且實驗人員的操作質量也不盡相同 ,同一種現象也可能有些許差異 ,當用描述出來的現象的差異可能變大也可能變小 。所以很多人看到細胞被細菌汙染了 ,不好處理 ,而卻描述出來的現象和流傳的黑膠蟲類似 ,就會把培養失敗的原因歸結到無法處理的黒膠蟲汙染,甚至可能說它發現的是真正的黑膠蟲 。這樣的事情多了 ,黑膠蟲就會人為的變種 ,像什麽的都有 。黑膠蟲是否存在 ,還有待於科學的發展 。但有一點可以肯定的 ,大部分人發現的“黒膠蟲”並不是真正那個未知的黒膠蟲 ,而是不很常見的細菌 、真菌 、原蟲等微生物汙染 。