原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出後立即培養的細胞 。原代細胞不僅廣泛應用於分子 、細胞生物學和生物醫學基礎研究 ，如蛋白質組學 、基因組學 、細胞株（係）研究 、DNA ，RNA和遺傳學研究等 ，還可應用於當今熱門的生物醫藥產業如藥物篩選 、藥物代謝和毒理研究 、癌症藥物的研究等 。

原代細胞如何進行培養 ？

常用的原代細胞培養有組織塊培養和分散細胞培養 。

分散細胞培養大致步驟為 ：將動物組織從機體中取出離散成單個細胞（常用胰蛋白酶） ，置合適的培養基中培養 ，使細胞 得以生存 、生長和繁殖（注意整個過程無菌） 。

組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上 ，加入培養基後進行培養 。

原代細胞培養中的常見錯誤及正確操作方法 ？

錯誤＃1 ：一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間

糾正＃1 ：原代細胞對解凍過程非常敏感 ，因此將小瓶置於37℃水浴中 ，保持並輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的 。然後應立即從水浴中取出小瓶 ，並轉移到無菌操作台 。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒 ，以便可以立即用於接種細胞 ，並置於培養箱中 。

錯誤＃2 ：解凍小瓶後直接離心原代細胞

糾正＃2 ：尊龍凱時不建議在解凍後離心細胞 ，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害 。記住 ，在恢複原代細胞後的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO 。

錯誤＃3 ：允許原代細胞變得過於融合

糾正＃3 ：當生長至100％匯合時 ，原代細胞可以變得衰老 。記住 ，原代細胞不是100％純 ，因此重要的是盡量減少汙染細胞的生長 。尊龍凱時建議在細胞達到90-95％融合時 ，對原代細胞進行傳代培養 。

錯誤＃4 ：傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正＃4 ：當細胞傳代時 ，使用低濃度的胰蛋白酶並在顯微鏡下密切監測細胞 。此外 ，記得在胰蛋白酶消化後完全中和細胞中的胰酶 ，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞 。推薦專門為原代細胞配製的胰蛋白酶中和溶液 ，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑製劑 。

錯誤＃5 ：原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正＃5 ：通常尊龍凱時不推薦重新凍存原代細胞 ，因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化 。原代細胞非常敏感 ，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷 。

錯誤＃6 ：原代細胞可以無限的增殖

糾正＃6 ：與細胞係不同 ，原代細胞具有有限的擴增能力 。尊龍凱時建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移 。此外 ，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型 ，你應該密切監測細胞形態 ，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移 ，大量生長從而成為主要細胞 。