很多人覺得細胞凍存很簡單 ，但是有些注意事項操作不好會影響或是損壞細胞的質量哦 ，今天就來給大家總結下 ，凍存細胞的相關注意事項 。

注意事項:

1.欲冷凍保存之細胞應在生長良好(logphase)且存活率高之狀態 ，約為80~90%致密度 。冷凍檢則細胞是否仍保有其特有性質，例如hybridoma應在冷凍保存至二日測試是否有抗體之產生 。

2.細胞在液氮中可長期凍存無限時間 ，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月 。

3.注意冷凍保護劑之品質 。DISO應為試劑等 ，無菌且無色以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品 ，如Sigma D-2650) ，以5~ 10mI小體積分裝 ，4C避光保存 ，勿作多次解凍 。Glycerol亦應為試劑等 ，以高壓蒸汽滅菌後避光保存 。

在開啟後年內使用 ，因長期儲存後對細胞會有毒性 。本方法中先製備雙倍凍存液 ，可避免DMSO直接加入時釋放的熱裏對細胞的損傷 。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高參 ，可降低細胞受損 。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化 ，可換用10%甘油凍存 。

4.冷凍保存Z細胞濃度:

①normal human fibroblast : 1~ 3x 10＇ce1ls/ml

②hybridoma: 1~3x 10*cells/m1,細胞濃度不要太高 ，某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時後死去 。

③adherent tumor lines:5~ 7x10 ，依細胞種類而異。Adenocarcinoma解凍後須較高之濃度 ，而HeLa隻需1~3x 10＇cells/ml

④other suspensions:5~ 10X 10＇cells/ml ，human lymphocyte 須至少5X 10＇cells/ml 。

5.凍存可用10%~90%的血清 ，般高濃度血清有助於維護細胞活力 ，此處介紹20%終濃度有利於細胞懸浮而少沉積(4 度時) ，複蘇存活率在80%~90%以上 ，對原代培養細胞 ，以90%血清凍存更為有效 。